论文部分内容阅读
目的 克隆产甲酸草酸杆菌甲酰辅酶A转移酶基因(frc),检测其在真核细胞中的表达。方法 用聚合酶链式反应技术从产甲酸草酸杆菌基因组DNA中扩增frc基因片段并插入真核表达载体获取重组质粒pEGFP-frc,通过限制性内切酶酶切电泳和测序鉴定重组质粒。重组质粒转染人胚。肾293细胞,检测frc基因在mRNA和蛋白水平上的表达。被转染细胞在含草酸培养液中培养,检测0~72h培养液中草酸浓度的变化。结果 frc基因的真核表达载体构建成功。转染293细胞后24~72h,可观察到明亮的绿色荧光,在mRNA和蛋白水平