探讨T细胞死亡相关基因8(TDAG8)与氧糖缺失-复糖复氧诱发大鼠神经元凋亡时内源性保护机制的关系。
方法原代大鼠皮质神经元以1×105个/ml的浓度种植于6孔板，采用随机数字表法分为5组：对照组(C组，n＝24)、氧糖缺失-复糖复氧组(OGD/R组，n＝48)、TDAG8激动剂BTB09089组(BTB组，n＝24)和TDAG8-siRNA组(siRNA组，n＝24)和空白载体组(V组，n＝24)。采用无糖无血清的Locker缓冲液，在含有95%N2-5%CO2，37 ℃的厌氧培养箱中孵育60 min，然后正常培养的方法制备氧糖缺失-复糖复氧损伤模型。BTB组、siRNA组和V组于复糖复氧前24 h时分别加入20 μmol/L TDAG8激动剂BTB09089、200 pmol/L TDAG8-siRNA、6 μl/200 μl转染试剂。于复糖复氧6 h时，测定神经元活力和LDH漏出量；采用实时荧光定量PCR法测定神经元TDAG8和caspase-3的mRNA表达水平；OGD/R组分别于复糖复氧即刻、3、6、12和24 h时采用Western blot法测定TDAG8、caspase-3的表达；C组、OGD/R组、BTB组、siRNA组和V组于复糖复氧后6 h时测定TDAG8、caspase-3、p-Akt的表达。
结果OGD/R组复糖复氧后TDAG8表达逐渐上调，caspase-3表达于复糖复氧6 h时达峰值。与C组比较，OGD/R组、V组和siRNA组神经元活力降低，LDH漏出量升高，神经元TDAG8、caspase-3及其mRNA和p-Akt表达上调(P<0.05)；与OGD/R组比较，BTB组神经元TDAG8及其mRNA和p-Akt表达上调，caspase-3及其mRNA表达下调，神经元活力升高，LDH漏出量降低，siRNA组TDAG8及其mRNA和p-Akt表达下调，caspase-3及其mRNA表达上调，神经元活力降低，LDH漏出量升高(P<0.05)，V组上述指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。
结论TDAG8参与了氧糖缺失-复糖复氧诱发大鼠神经元凋亡时部分内源性保护机制，该作用可能与激活Akt信号通路有关。