论文部分内容阅读
RAS突变的检测为指导结直肠癌的预测和预后提供了有力的工具。探讨一种简洁、低成本的用于检测KRAS基因突变的多重引物等位基因识别方法（multiplex primer allelic discrimination, MPmAD）。利用不对称扩增和含锁定核酸（locked nucleic acid, LNA）的等位基因特异性引物、以及共同的反向引物和探针，进行多重孔检测和参考孔检测，以多重检测和参考检测的扩增循环数值差（ΔCq）来判定结果。同时使用福尔马林固定石蜡包埋组织（Formalin Fixed and Paraffin Embedded Tissues, FFPET）样本或在野生型基因组DNA背景下混合质粒进行非临床性能评价，并采用Kappa检验比较MPmAD与Sanger测序的结果一致性。该方法对KRAS热点突变检测灵敏度至少为3%;凝胶电泳也验证了方法的特异性；重现性的变异系数（coefficient of variation, CV）＜15%;同源基因检测未观察到交叉反应。通过分析115例FFPET标本，MPmAD法与Sanger测序结果之间无统计学差异（k＞0.9;p＜0.001）。MPmAD方法可以简洁、低成本地检测KRAS热点突变。