【摘 要】
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目的:利用生物信息学方法预测miR-125b的新靶基因,在肝癌细胞系中进行验证和结合位点的鉴定,为阐明miR-125b在肝癌发生发展中的作用和机制提供新线索。方法:Western印迹分析
【机 构】
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军事医学科学院野战输血研究所干细胞与再生医学研究室; 军事医学科学院华南干细胞与再生医学研究中心;
【基金项目】
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国家自然科学基金青年科学基金(31301199);广州市健康医疗协同创新重大专项(201400000003-1)
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目的:利用生物信息学方法预测miR-125b的新靶基因,在肝癌细胞系中进行验证和结合位点的鉴定,为阐明miR-125b在肝癌发生发展中的作用和机制提供新线索。方法:Western印迹分析在肝癌细胞中过表达miR-125b后上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白的表达情况;对肝癌患者肿瘤组织及癌旁组织的miR-125b表达差异进行实时定量PCR检测,同时对SNAIL1的表达情况进行免疫组化检测;用生物信息学方法预测miR-125b的新靶基因;利用双萤光素酶报告系统验证miR-125b在预测的新靶基因mRNA的3’非翻译区是否有直接结合位点;构建新靶基因的真核过表达载体,检测新靶基因过表达后对miR-125b表达水平的影响。结果:在肝癌细胞中过表达miR-125b可抑制细胞EMT过程,下调α平滑肌肌动蛋白、神经钙黏素的表达;miR-125b在肝癌患者肿瘤组织中的表达远低于癌旁组织,而SNAIL1作为调控EMT的主要转录因子之一,其在肿瘤组织中的入核比例明显高于癌旁组织;用TargetScan预测到snail1是miR-125b的潜在靶点之一,但双萤光素酶实验表明snail1并非miR-125b的直接靶基因。此外,我们意外发现在肝癌细胞中过表达SNAIL1可上调miR-125b的表达。结论:miR-125b可抑制肝癌EMT过程,但并非直接通过靶向snail1发挥作用,两者在肝癌细胞中存在着复杂的间接调控关系。
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