【摘 要】
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为了获得稳定、可持续传代的绵羊肝细胞,采集110～120 d的绵羊胚胎肝和正常未怀孕成年绵羊肝,用胶原酶两步灌流法分离肝细胞;用PAS染色法和CK-18免疫荧光法鉴定细胞;用CCK-8测定肝细胞第6、12、24、36、48、60、72和96小时的D450值,绘制生长曲线.结果 显示,获得的绵羊原代肝细胞形态完整,贴壁良好,平均存活率为92％.PAS和CK-18荧光染色呈阳性,肝细胞纯度在95％以上.胎羊原代肝细胞可传代,成年绵羊肝细胞不可传代.由以上结果可知,将经典的Seglen两步原位胶原酶灌流法进行优
【机 构】
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河北农业大学动物医学院,河北保定071000;山西农业大学动物医学院,山西晋中030620;河北农业大学动物医学院,河北保定071000;江苏省农业科学院兽医研究所,江苏南京210014;山西农业大学
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为了获得稳定、可持续传代的绵羊肝细胞,采集110～120 d的绵羊胚胎肝和正常未怀孕成年绵羊肝,用胶原酶两步灌流法分离肝细胞;用PAS染色法和CK-18免疫荧光法鉴定细胞;用CCK-8测定肝细胞第6、12、24、36、48、60、72和96小时的D450值,绘制生长曲线.结果 显示,获得的绵羊原代肝细胞形态完整,贴壁良好,平均存活率为92％.PAS和CK-18荧光染色呈阳性,肝细胞纯度在95％以上.胎羊原代肝细胞可传代,成年绵羊肝细胞不可传代.由以上结果可知,将经典的Seglen两步原位胶原酶灌流法进行优化改良,可获得大量高纯度、高活性的绵羊原代肝细胞,胎羊肝细胞具有良好的活性,可满足需要大量肝细胞的体外试验研究.
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为了对云南某鸡场发生鸡急性死亡的疑似禽霍乱病例进行病原确诊,无菌采集送检死鸡肝脏组织进行细菌分离培养、生化鉴定、细菌16S rRNA基因分析及荚膜分型鉴定,对分离菌株进行耐药性、致病性分析.结果 ,该分离菌为荚膜A型多杀性巴氏杆菌;药敏试验表明,分离菌对头孢氨苄、头孢他啶、阿莫西林、氨苄西林等8种药物敏感,对大观霉素、复方新诺明等6种药物中度敏感,对卡那霉素、链霉素、四环素等12种药物耐药;耐药基因检测显示,该分离株仅含有磺胺类sul2基因和四环素类tetB基因;动物试验表明,接种500 CFU的45日龄
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冠状病毒是所有RNA病毒中基因组最大的正链RNA病毒,仅感染脊椎动物,与多种动物和人类的疫病有关.在冠状病毒入侵、细胞内复制、组装、运输及出芽释放过程中,宿主细胞骨架与冠状病毒密切接触.本文对冠状病毒诱导或劫持的细胞骨架结构(包括肌动蛋白、微管和中间纤维)机制作简要概述,为进一步深入研究细胞骨架在病毒感染中的作用机制提供参考.
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