大肠杆菌aroL基因敲除及其对莽草酸合成的影响

来源 :复旦学报(自然科学版) | 被引量 : 0次 | 上传用户：lovely_fox

【摘要】

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以E.coli DH5α基因组为模板克隆莽草酸激酶Ⅱ基因（aroL）,构建质粒pMD-aroL,经HpaⅠ、BsaBⅠ酶切后插入卡那霉素抗性基因（kan）得pMD-aroL：：kan,利用pKD46的λ重组系统,用该质粒上的

【作者】

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付小花高益范郝思捷张伯生任大明

【机构】

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复旦大学生命科学学院遗传学研究所

【出处】

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复旦学报(自然科学版)

【发表日期】

：

2007年3期

【关键词】

：

aroL 基因敲除 Red重组系统

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以E.coli DH5α基因组为模板克隆莽草酸激酶Ⅱ基因（aroL）,构建质粒pMD-aroL,经HpaⅠ、BsaBⅠ酶切后插入卡那霉素抗性基因（kan）得pMD-aroL：：kan,利用pKD46的λ重组系统,用该质粒上的kan及两端的aroL同源序列替换E.coli Top10F′基因组上的aroL基因,再运用质粒pCP20编码的FLP重组酶消除kan基因.Southern blot证实基因敲除是成功的,测序结果表明kan已经从基因组上消除,摇瓶发酵显示构建的基因工程菌的莽草酸产量是原始菌株的1.57

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