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本文报道用两步PCR法快速检测细胞培养物中污染的支原体（Mycoplasma）。两套引物选自16S rRNA和23S rRNA保守区域，外部引物PF1，PR1扩增的DNA片段在360～500bp之间，内部引物PF2，PR2扩增的DNA片段在140～220bp之间。试验表明，两步PCR法能检出污染细胞培养物七种常见的支原体。17份待检细胞培养物，两步PCR法检测，9份（52.9%）为阳性，直接培养法检测，5份（29.4%）为阳性。采用快速热循仪，使PCR反应时间大大缩短，30次循环仅需20分钟。反应液的用量也仅10μl，提高了检测效率，节省了材料，降低了试验用费。本文就两步PCR的灵敏度等特性也作了初步测试。