【摘 要】
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目的改良人骨髓间充质干细胞(HBMSCs)体外分离培养的方法。方法采用含体积比为10%胎牛血清的α-MEM培养体系,通过密度梯度离心和贴壁筛选法从人骨髓中分离培养贴壁细胞,流式
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目的改良人骨髓间充质干细胞(HBMSCs)体外分离培养的方法。方法采用含体积比为10%胎牛血清的α-MEM培养体系,通过密度梯度离心和贴壁筛选法从人骨髓中分离培养贴壁细胞,流式检测该细胞表面标志物,体外诱导成脂、成骨、成软骨分化并鉴定该细胞的多项分化能力,集落克隆形成和MTT试验检测该细胞的活力和增殖能力,并分别与经典的Dexter长期培养体系比较。结果采用改良方法从人骨髓中分离、培养出具有塑料底物粘附性的细胞,目的细胞不表达或低表达CD14、CD34、CD45,高表达CD73、CD90、CD105;体外成功诱导脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞分化;Dexter-LTC体系培养的集落个数(为8.0±1.0)个、单个集落细胞数为(59.2±8.2)个,改良法培养的集落个数为(11.3±1.53)个、单个集落中细胞数为(66.5±14.4)个(P<0.05);在Dexter-LTC培养体系下,BMSCs于培养d10进入对数生长期、d19进入平台期,改良法培养BMSCs d4进入对数生长期、d15进入平台期。结论成功建立了改良的HBMSCs体外分离培养体系,且该方法培养的HBMSCs体外扩增速度、增殖能力、克隆形成能力明显改善。
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