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本研究以猪耳皮组织为材料,采用胰蛋白酶冷热处理结合法成功地分离和培养了猪耳皮肤成纤维细胞.此方法的细胞存活率相对于胰蛋白酶热处理法较高.传代细胞与原代细胞的形态和生长速度均相似.传代细胞未检测到凋亡现象.细胞已传至15代以上,染色体倍性正常,说明我们所建立的胰蛋白酶冷热处理结合法可以快速有效的分离和培养猪耳皮肤成纤维细胞,并且能稳定的进行传代培养.