【摘 要】
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为建立一种快速、特异的猪肺炎支原体（Mhp）、猪圆环病毒2型（PCV2）和猪圆环病毒3型（PCV3）的多重荧光定量PCR鉴别检测方法，根据Mhp、PCV2和PCV3及β-actin基因保守区域序列，设计合成4对特异性引物及4种荧光基团标记的TaqMan探针。构建含有各目的基因的重组质粒标准品，筛选引物，优化反应条件，成功建立多重荧光定量PCR后评价该方法的特异性、敏感性、重复性并将该方法初步应用于
【基金项目】
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柳州市科技计划项目（2020NACB0804）； 南宁市科学研究与技术开发计划项目（20202090）； 南宁市优秀青年科技人才项目（RC20190102）； 贵港市科学研究与技术开发计划项目（桂科计2117003）；
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为建立一种快速、特异的猪肺炎支原体（Mhp）、猪圆环病毒2型（PCV2）和猪圆环病毒3型（PCV3）的多重荧光定量PCR鉴别检测方法，根据Mhp、PCV2和PCV3及β-actin基因保守区域序列，设计合成4对特异性引物及4种荧光基团标记的TaqMan探针。构建含有各目的基因的重组质粒标准品，筛选引物，优化反应条件，成功建立多重荧光定量PCR后评价该方法的特异性、敏感性、重复性并将该方法初步应用于临床样品检测。结果显示，该方法能同时特异性地鉴别检测Mhp、PCV2和PCV3,检测PRRSV、CSFV、PRV、JEV、PPV、PEDV、TGEV、FMDV病毒核酸无交叉反应；对Mhp、PCV2、PCV3和β-actin标准质粒的最小检出量分别为26.4、66.7、25.6、5990 copies/μL;该方法重复性好，组间和组内试验变异系数低于1.5%;用该方法检测101份临床样本，Mhp、PCV2和PCV3阳性率分别为20.8%、36.6%和33.7%。建立的多重荧光定量PCR方法能同时快速和定量检测Mhp、PCV2和PCV3,较普通PCR更敏感，实用性强，有效避免了多次检测耗时长、费用高的问题，为Mhp、PCV2和PCV3的监测和防控提供了可靠的检测技术。
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