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摘 要：利用QuEChERS法提取，采用GC-MS检测技术，建立10种有机磷农药（对硫磷、乙酰甲胺磷、甲基对硫磷、杀螟硫磷、三唑磷、敌敌畏、乐果、马拉硫磷、氧乐果、联苯菊酯）的同时检测方法，并分析汕头市白花蛇舌草中OPPs残留水平及其种类。结果表明，10种OPPs在1.0～20.0 mg/mL浓度范围内，各OPPs定量离子峰面积与质量浓度之间呈良好的线性关系;检出限为0.02～0.1 mg/kg，定量限为0.07～0.4 mg/kg;加标回收率在89.2%～96.4%，相对标准偏差为1.7%～3.6%。
关键词：气相色谱-质谱联用法;白花蛇舌草;有机磷农药;残留
白花蛇舌草（Hedyotis diffusa），又名蛇舌癀、羊须草、蛇针草、节节结蕊草、蛇总管，含有车叶草甙、车叶草甙酸、鸡屎藤次甙、熊果酸、β-谷甾醇、豆甾醇和对-香豆酸等[1]成分;全草可入药，性味微苦、微甘，具有清热解毒、消痛散结、利尿除湿、活血止痛等功效，广泛分布于广东、广西、云南、福建等省份。在潮汕地区，白花蛇舌草常被当地居民当做清热消暑，解渴止咳的凉茶食用。但在白花蛇舌草种植过程中，常使用高效广谱杀虫剂有机磷农药（Organophosphorus Pesticide， OPPs）进行病虫害防治，导致草药中发生不同程度的OPPs残留。
目前关于OPPs残留量测定方法包括气相色谱法（GC）、液相色谱法（LC）、气相色谱-质谱联用法（GC-MS）、气相色谱-串联质谱法（GC-MS/MS）等[2-5]。其中GC法和LC法特异性差、重复性低;GC-MS/MS具有灵敏度高、特异性强等优点，但仪器价格动昂贵而推广普及率低;GC-MS法具有分析速度快、特异性强、准确度高、精密度好，仪器价格适与推广普及率高等特点，因此GC-MS已成为检验检测机构测定OPPs残留主要检测技术。为评估白花蛇舌草中OPPs残留水平及其种类，本研究利用QuEChERS法提取，采用GC-MS检测技术，拟建立10种有机磷农药（对硫磷、乙酰甲胺磷、甲基对硫磷、杀螟硫磷、三唑磷、敌敌畏、乐果、马拉硫磷、氧乐果和联苯菊酯）同时检测方法，分析汕头市白花蛇舌草中OPPs残留水平及其种类，为其质量控制提供科学数据。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
10种OPPs（对硫磷、乙酰甲胺磷、甲基对硫磷、杀螟硫磷、三唑磷、敌敌畏、乐果、马拉硫磷、氧乐果和联苯菊酯）标准品，购自德国Dr.Ehrenstorfer公司;丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、正己烷和乙腈，均为色谱纯，购自美国天地公司;氯化钠、无水硫酸钠，均为分析纯，购自西陇科学股份有限公司;石墨化炭黑（GCB），购于江苏先丰纳米材料科技有限
公司。
OPPs标准储备液：分别准确称取适量的每种OPPs标准品，用丙酮分别配置成浓度为100～1 000 mg/mL的标准储备溶液。OPPs混合标准工作溶液：根据需要再用丙酮逐级稀释成适用浓度的系列混合标准工作溶液。
1.2 仪器与设备
Agilent 8890A/5977B型气质联用仪（美国安捷伦公司）;BSA124S型电子天平，德国Sartorius公司;BUCHI R-200型旋转蒸发仪，瑞士BUCHI公司。
1.3 GC-MS/MS条件
1.3.1 色谱条件
色谱柱为DB-5MS毛细管气相色谱柱（30 m×0.25 mm×
0.25 μm）;进样口温度280 ℃;进样方式：无分流进样，
1.5 min后开阀;载气为氦气，流速为1.0 mL/min;进样量
1 μL;溶剂延迟时间5 min。
程序化升温程序：初始温度50 ℃，保持2 min;以
30 ℃/min的速度升温至180 ℃，保持10 min，再以30 ℃/min的速度升温至270 ℃，保持10 min。
1.3.2 质谱条件
电子轰击离子源（EI）;色谱-质谱接口温度270 ℃;离子源温度200 ℃;检测方式：选择离子监测（SRM）;10种OPPs化合物的保留时间、定量和定性选择离子见表1。
表1 OPPs化合物的保留时间、定量和定性选择离子表
序号 名称 保留时间/min 特征碎片离子（amu）
定量离子 定性离子 丰度比
1 对硫磷 18.48 291 186、235 100∶23∶35
2 乙酰甲胺磷 5.81 136 94、183 100∶50∶3
3 甲基对硫磷 16.62 263 233、246 100∶66∶8
4 杀螟硫磷 17.59 277 260、247 100∶52∶60
5 三唑磷 24.02 161 172、257 100∶47∶38
6 敌敌畏 5.81 109 185、220 100∶34∶7
7 乐果 13.43 125 143、229 100∶16∶11
8 马拉硫磷 17.99 173 158、143 100∶36∶15
9 氧乐果 10.87 110 109、156 100∶26∶93
10 聯苯菊酯 26.70 181 166、165 100∶25∶23
1.4 样品前处理
1.4.1 提取
将白花蛇舌草粉碎后过80～100目筛，贮于棕色瓶中。准确称取白花蛇舌草粉末2.0 g置于50 mL离心管中，加入4 mL水和20 mL丙酮，均质提取10 min;将提取液过滤，残渣再用50 mL丙酮重复提取1次，合并滤液于250 mL分液漏斗中;加入150 mL氯化钠水溶液和50 mL二氯甲烷，振摇3 min，静置分层，收集二氯甲烷相;水相再用50 mL二氯甲烷重复提取两次，合并二氯甲烷相;经无水硫酸钠脱水，待净化。 1.4.2 净化
将石墨化炭黑固相萃取柱用6 mL乙酸乙酯-正己烷预淋洗，弃去淋洗液;将2 mL待净化液倾入上述连接柱中，并用3 mL乙酸乙酯-正己烷分3次洗涤浓缩瓶，将洗涤液倾入石墨化炭黑固相萃取柱中，再用12 mL乙酸乙酯-正己烷洗脱，收集上述洗脱液至浓缩瓶中，于40 ℃水浴中旋转蒸发至近干，用乙酸乙酯溶解并定容至1.0 mL，供气相色谱-质谱测定。
2 结果与讨论
2.1 气相-质谱条件的优化
将标准工作溶液和试样依次注入色谱-质谱联用仪中，在正负离子模式下，分别对10种OPPs进行选择离子监测，并采用多段程序升温方式对10种OPPs進行有效分离。由图1可知，在多段程序升温方式下，DB-5MS色谱柱可同时实现10种OPPs完全分离，且各化合物的色谱峰响应值高、峰形对称尖锐;经微调质谱参数，优化后的10种OPPs质谱条件见表1。
2.2 线性关系、检出限和加标回收率
结果显示，10种OPPs在1.0～20.0 ng/mL浓度范围内，各OPPs定量离子峰面积与质量浓度之间呈良好的线性关系，且相关系数（r2）在0.996 3～0.999 1;白花蛇舌草中10种OPPs的检出限为0.02～0.10 mg/kg，定量限为0.07～
0.4 mg/kg;10种OPPs的加标回收率在89.2%～96.4%，相对标准偏差为1.7%～3.6%。
2.3 实际样品测定
采用本文所建的GC-MS法对汕头市随机采样的10份白花蛇舌草进行10种OPPs残留水平和种类筛查。结果显示，所检测样品中均未检测到10种OPPs残留，该OPPs均为被我国明令禁止使用的农药，可能在白花蛇舌草种植过程中均未使用。
3 结论
利用QuEChERS法提取，采用GC-MS检测技术，成功的建立10种有机磷农药同时检测方法，可为检验检测白花蛇舌草中OPPs残留水平及其种类提供检测方法。
参考文献
[1]卢文杰，韩飞，卢任杰.潮汕地区3种中草药中10种有机磷农药残留分布特征及风险评估[J].中国医院用药评价与分析，2021，21（3）：306-310.
[2] 周亮，贺春霞，邱彬，等.气相色谱质谱法快速测定多种基质中23种有机磷农药和2种鼠药[J].海峡预防医学杂志，2021，27（3）：7-10.
[3]王威，窦文渊，郭杰煌，等.加速溶剂萃取-气相色谱-质谱法同时测定污泥中37种有机磷类及10种拟除虫菊酯类农药[J].理化检验（化学分册），2021，57（7）：591-597.
[4]梁浩楠，刘庆波，凌佳音，等.酶法-超声提取白花蛇舌草总黄酮工艺研究[J].中国药学杂志，2021，56（13）：1041-1047.
[5]常波，王艳萍，杨帆，等.气相色谱法同时测定果蔬中常见有机磷农药残留量[J].化学研究与应用，2021，33（8）：1626-1632.
关键词：气相色谱-质谱联用法;白花蛇舌草;有机磷农药;残留
白花蛇舌草（Hedyotis diffusa），又名蛇舌癀、羊须草、蛇针草、节节结蕊草、蛇总管，含有车叶草甙、车叶草甙酸、鸡屎藤次甙、熊果酸、β-谷甾醇、豆甾醇和对-香豆酸等[1]成分;全草可入药，性味微苦、微甘，具有清热解毒、消痛散结、利尿除湿、活血止痛等功效，广泛分布于广东、广西、云南、福建等省份。在潮汕地区，白花蛇舌草常被当地居民当做清热消暑，解渴止咳的凉茶食用。但在白花蛇舌草种植过程中，常使用高效广谱杀虫剂有机磷农药（Organophosphorus Pesticide， OPPs）进行病虫害防治，导致草药中发生不同程度的OPPs残留。
目前关于OPPs残留量测定方法包括气相色谱法（GC）、液相色谱法（LC）、气相色谱-质谱联用法（GC-MS）、气相色谱-串联质谱法（GC-MS/MS）等[2-5]。其中GC法和LC法特异性差、重复性低;GC-MS/MS具有灵敏度高、特异性强等优点，但仪器价格动昂贵而推广普及率低;GC-MS法具有分析速度快、特异性强、准确度高、精密度好，仪器价格适与推广普及率高等特点，因此GC-MS已成为检验检测机构测定OPPs残留主要检测技术。为评估白花蛇舌草中OPPs残留水平及其种类，本研究利用QuEChERS法提取，采用GC-MS检测技术，拟建立10种有机磷农药（对硫磷、乙酰甲胺磷、甲基对硫磷、杀螟硫磷、三唑磷、敌敌畏、乐果、马拉硫磷、氧乐果和联苯菊酯）同时检测方法，分析汕头市白花蛇舌草中OPPs残留水平及其种类，为其质量控制提供科学数据。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
10种OPPs（对硫磷、乙酰甲胺磷、甲基对硫磷、杀螟硫磷、三唑磷、敌敌畏、乐果、马拉硫磷、氧乐果和联苯菊酯）标准品，购自德国Dr.Ehrenstorfer公司;丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、正己烷和乙腈，均为色谱纯，购自美国天地公司;氯化钠、无水硫酸钠，均为分析纯，购自西陇科学股份有限公司;石墨化炭黑（GCB），购于江苏先丰纳米材料科技有限
公司。
OPPs标准储备液：分别准确称取适量的每种OPPs标准品，用丙酮分别配置成浓度为100～1 000 mg/mL的标准储备溶液。OPPs混合标准工作溶液：根据需要再用丙酮逐级稀释成适用浓度的系列混合标准工作溶液。
1.2 仪器与设备
Agilent 8890A/5977B型气质联用仪（美国安捷伦公司）;BSA124S型电子天平，德国Sartorius公司;BUCHI R-200型旋转蒸发仪，瑞士BUCHI公司。
1.3 GC-MS/MS条件
1.3.1 色谱条件
色谱柱为DB-5MS毛细管气相色谱柱（30 m×0.25 mm×
0.25 μm）;进样口温度280 ℃;进样方式：无分流进样，
1.5 min后开阀;载气为氦气，流速为1.0 mL/min;进样量
1 μL;溶剂延迟时间5 min。
程序化升温程序：初始温度50 ℃，保持2 min;以
30 ℃/min的速度升温至180 ℃，保持10 min，再以30 ℃/min的速度升温至270 ℃，保持10 min。
1.3.2 质谱条件
电子轰击离子源（EI）;色谱-质谱接口温度270 ℃;离子源温度200 ℃;检测方式：选择离子监测（SRM）;10种OPPs化合物的保留时间、定量和定性选择离子见表1。
表1 OPPs化合物的保留时间、定量和定性选择离子表
序号 名称 保留时间/min 特征碎片离子（amu）
定量离子 定性离子 丰度比
1 对硫磷 18.48 291 186、235 100∶23∶35
2 乙酰甲胺磷 5.81 136 94、183 100∶50∶3
3 甲基对硫磷 16.62 263 233、246 100∶66∶8
4 杀螟硫磷 17.59 277 260、247 100∶52∶60
5 三唑磷 24.02 161 172、257 100∶47∶38
6 敌敌畏 5.81 109 185、220 100∶34∶7
7 乐果 13.43 125 143、229 100∶16∶11
8 马拉硫磷 17.99 173 158、143 100∶36∶15
9 氧乐果 10.87 110 109、156 100∶26∶93
10 聯苯菊酯 26.70 181 166、165 100∶25∶23
1.4 样品前处理
1.4.1 提取
将白花蛇舌草粉碎后过80～100目筛，贮于棕色瓶中。准确称取白花蛇舌草粉末2.0 g置于50 mL离心管中，加入4 mL水和20 mL丙酮，均质提取10 min;将提取液过滤，残渣再用50 mL丙酮重复提取1次，合并滤液于250 mL分液漏斗中;加入150 mL氯化钠水溶液和50 mL二氯甲烷，振摇3 min，静置分层，收集二氯甲烷相;水相再用50 mL二氯甲烷重复提取两次，合并二氯甲烷相;经无水硫酸钠脱水，待净化。 1.4.2 净化
将石墨化炭黑固相萃取柱用6 mL乙酸乙酯-正己烷预淋洗，弃去淋洗液;将2 mL待净化液倾入上述连接柱中，并用3 mL乙酸乙酯-正己烷分3次洗涤浓缩瓶，将洗涤液倾入石墨化炭黑固相萃取柱中，再用12 mL乙酸乙酯-正己烷洗脱，收集上述洗脱液至浓缩瓶中，于40 ℃水浴中旋转蒸发至近干，用乙酸乙酯溶解并定容至1.0 mL，供气相色谱-质谱测定。
2 结果与讨论
2.1 气相-质谱条件的优化
将标准工作溶液和试样依次注入色谱-质谱联用仪中，在正负离子模式下，分别对10种OPPs进行选择离子监测，并采用多段程序升温方式对10种OPPs進行有效分离。由图1可知，在多段程序升温方式下，DB-5MS色谱柱可同时实现10种OPPs完全分离，且各化合物的色谱峰响应值高、峰形对称尖锐;经微调质谱参数，优化后的10种OPPs质谱条件见表1。
2.2 线性关系、检出限和加标回收率
结果显示，10种OPPs在1.0～20.0 ng/mL浓度范围内，各OPPs定量离子峰面积与质量浓度之间呈良好的线性关系，且相关系数（r2）在0.996 3～0.999 1;白花蛇舌草中10种OPPs的检出限为0.02～0.10 mg/kg，定量限为0.07～
0.4 mg/kg;10种OPPs的加标回收率在89.2%～96.4%，相对标准偏差为1.7%～3.6%。
2.3 实际样品测定
采用本文所建的GC-MS法对汕头市随机采样的10份白花蛇舌草进行10种OPPs残留水平和种类筛查。结果显示，所检测样品中均未检测到10种OPPs残留，该OPPs均为被我国明令禁止使用的农药，可能在白花蛇舌草种植过程中均未使用。
3 结论
利用QuEChERS法提取，采用GC-MS检测技术，成功的建立10种有机磷农药同时检测方法，可为检验检测白花蛇舌草中OPPs残留水平及其种类提供检测方法。
参考文献
[1]卢文杰，韩飞，卢任杰.潮汕地区3种中草药中10种有机磷农药残留分布特征及风险评估[J].中国医院用药评价与分析，2021，21（3）：306-310.
[2] 周亮，贺春霞，邱彬，等.气相色谱质谱法快速测定多种基质中23种有机磷农药和2种鼠药[J].海峡预防医学杂志，2021，27（3）：7-10.
[3]王威，窦文渊，郭杰煌，等.加速溶剂萃取-气相色谱-质谱法同时测定污泥中37种有机磷类及10种拟除虫菊酯类农药[J].理化检验（化学分册），2021，57（7）：591-597.
[4]梁浩楠，刘庆波，凌佳音，等.酶法-超声提取白花蛇舌草总黄酮工艺研究[J].中国药学杂志，2021，56（13）：1041-1047.
[5]常波，王艳萍，杨帆，等.气相色谱法同时测定果蔬中常见有机磷农药残留量[J].化学研究与应用，2021，33（8）：1626-1632.