【摘 要】
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使用α因子做为信号肽的酵母系统分泌表达猪表皮生长因子(pEGF)时,由于对信号肽末端Glu-Ala氨基酸残基切除不完全,表达产物是Glu-Ala-pEGF和pEGF的混合物。本研究为了获得单
【机 构】
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华南农业大学兽医学院/广东省兽药研制与安全评价实验室,中国农业大学动物医学院
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(30771627);广州市科技计划资助项目(2006Z3-E0051)
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使用α因子做为信号肽的酵母系统分泌表达猪表皮生长因子(pEGF)时,由于对信号肽末端Glu-Ala氨基酸残基切除不完全,表达产物是Glu-Ala-pEGF和pEGF的混合物。本研究为了获得单一表达的pEGF产物,对pEGF基因进行适当的突变修改,构建缺失Glu-Ala重复基因序列的重组载体。把重组载体pPIC9-pEGF1-48电转化毕赤酵母,用同位素标记随机引物斑点杂交法筛选多拷贝整合转化子,并诱导大量表达。用硫酸铵沉淀及超滤的方法浓缩和纯化蛋白,并用Bradford检测方法对蛋白浓度进行了初步测定。结果表明,构建的重组载体经过BglⅡ线性化后稳定转入毕赤酵母中,转化子表型主要为MutS型;筛选的多拷贝MutS型转化子经诱导后成功表达约6000的pEGF1-48蛋白,经检测蛋白表达水平约为34mg/L。
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