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目的:构建E2F-1真核表达载体,建立稳定过表达E2F-1的胃癌细胞株,探讨E2F-1基因过表达对胃癌MGC-803细胞化疗敏感性的影响。方法:应用Trizol法从胃癌的癌组织中提取mRNA逆转录合成cDNA,按Gene—Bank公布的E2F-1基因序列设计带有酶切位点的引物并行扩增获得E2F-1的ORF片段;然后经限制性内切酶Ec,oRI和Hindm双酶切后将E2F-1定向克隆到真核表达载体pCMV-HA2中转化筛选。用脂质体Lipofectamine2000将该载体转染MGC-803胃癌细胞,然后用含