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目的
建立特异性敲除内毛细胞肌球蛋白轻链激酶(myosinlightchainkinase,MLCK)基因小鼠模型,初步评价敲除该基因对小鼠听功能的影响。
方法从DNA水平对Mlck基因敲除小鼠作基因型鉴定并验证敲除效率;以短声和8、16、32kHz短纯音作为刺激音对基因敲除组及对照组小鼠行听性脑干反应(ABR)测试,分析两组小鼠反应阈值及波形差异。
结果根据鼠尾DNAPCR结果能够初步判定小鼠基因型,分离内毛细胞提取DNA,PCR结果证实目的基因被剔除。Mlck基因敲除组小鼠短声及短纯音各频率ABR平均阈值较对照组均有升高,差异具有统计学意义(P值均<0.05);其中高频阈值升高更为显著,在32kHz两组平均阈值相差>20dB。基因敲除组小鼠16kHz短纯音60、50、40dBSPL声强下Ⅰ波幅值明显小于对照组,差异具有统计学意义(P值均<0.05)。两组小鼠16kHz短纯音在60dBSPL下的Ⅰ/Ⅱ、Ⅰ/Ⅲ波幅比差异无统计学意义(P值均>0.05)。
结论内毛细胞特异性敲除Mlck小鼠成功将目的基因剔除,敲除后小鼠听力受损,尤以高频明显。