将分子印迹固相萃取和高效液相色谱法联用,建立一种检测鱼肉中孔雀石绿和结晶紫及其代谢产物残留的新方法。以孔雀石绿为模板分子,甲基丙烯酸为功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂,本体聚合法合成分子印迹聚合物。并制成分子印迹固相萃取柱,优化分子印迹固相萃取的实验条件。鱼肉样品经过超声提取后,采用分子印迹固相萃取富集净化,用高效液相色谱法测定孔雀石绿和结晶紫及其代谢产物的残留量。该方法的线性范围孔雀石绿和结晶紫均为0.01～5μg/mL,隐色孔雀石绿和隐色结晶紫均为0.01～10μg/mL,相关系数为0.9943～0.9993,具有较好的线性关系;检出限孔雀石绿为0.12 ng/mL,结晶紫0.02 ng/mL,隐色孔雀石绿0.26 ng/mL,隐色结晶紫0.25 ng/mL。该方法对鱼肉样品的回收率为97.06%～111.83%,RSD为1.54%～10.49%。所建立的新方法简单快速、准确可行,而且有机溶剂用量少,被成功地应用于鱼肉中孔雀石绿和结晶紫及其代谢产物残留的测定。