【摘 要】
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目的:构建针对小鼠凝血因子Ⅸ(mFⅨ)基因的基因打靶置换型载体,并用于小鼠胚胎干细胞基因打靶研究.方法:在用噬斑原位杂交法克隆mFⅨ基因组DNA并完成结构分析的基础上,利用常
【机 构】
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第二军医大学基础医学部医学分子遗传学开放实验室,香港科技大学生物化学系
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目的:构建针对小鼠凝血因子Ⅸ(mFⅨ)基因的基因打靶置换型载体,并用于小鼠胚胎干细胞基因打靶研究.方法:在用噬斑原位杂交法克隆mFⅨ基因组DNA并完成结构分析的基础上,利用常规的分子克隆技术,设计并构建置换型载体,经过限制性内切酶酶切鉴定和PCR鉴定其结构正确后,用电穿孔法对体外培养的小鼠胚胎干细胞Rl株进行基因转移,经G418/GANC(Gancyclovlr)分组药物选择,进行pMFⅣDEL载体的应用研究.结果:构建获得包括正负双向选择基因的表达元件、长短同源臂等在内的基因打靶置换型载体pMFⅨDEL,在胚胎干细胞中能有效地发生重组,正负双向选择系统的应用对同源重组事件富集效率提高了24倍.结论:本研究构建获得了针对mFⅨ基因的置换型载体,在胚胎干细胞基因打靶中得到有效的应用.
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