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目的
观察羟基磷灰石(HAP)对巨噬细胞炎性反应及凋亡的影响。
方法将HAP用无血清1640培养基稀释至50、100、200、400 μg/ml，空白对照组为0 μg/ml，分别加入巨噬细胞中，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞活力，微量酶标仪法检测细胞上清液的乳酸脱氢酶(LDH)活性，实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)法检测细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β mRNA相对表达量，流式细胞术检测凋亡率，荧光酶标仪法测线粒体膜电位，Western blot检测细胞B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、活化半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Cleave Caspase-3)的表达。
结果巨噬细胞暴露于不同浓度HAP下，与空白对照组比较，细胞活力逐渐降低，LDH活性逐渐升高，HAP浓度为400 μg/ml最显著(P＝0.000、P＝0.001)。TNF-α、IL-1β mRNA相对表达量均逐渐上升[(1.49±0.07、1.77±0.12、1.92±0.53、2.20±0.49)、(1.51±0.06、2.70±0.17、3.19±0.12、4.32±0.59)]，HAP浓度为400 μg/ml最显著(P＝0.000、P＝0.000)。凋亡率逐渐增加[(3.68±1.16)%、(4.69±1.61)%、(8.14±1.08)%、(15.20±0.88)%、(22.90±0.99)%]，线粒体膜电位荧光强度逐渐下降，bcl-2蛋白的表达逐渐降低，Cleave Caspase-3蛋白表达逐渐增加，HAP浓度为400 μg/ml时均最显著(P＝0.000)。
结论HAP可诱导巨噬细胞经线粒体途径凋亡并上调炎症基因TNF-α、IL-1β mRNA的表达。