乳腺癌患者血浆miRNA-503表达水平研究

来源 :中国保健营养 | 被引量 : 0次 | 上传用户:nancyqi117
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  【摘 要】目的:探讨乳腺癌患者血浆中miR-503的表达水平。方法:采用实时定量RT-PCR方法检测20例乳腺癌患者及15例健康志愿者血浆中miR-503的表达水平。结果:乳腺癌患者血浆miR-503表达显著低于正常对照组,两者差异有统计学意义( P = 0.001)。结论:血浆miR-503在乳腺癌中的表达水平低于正常人,对于乳腺癌的诊断具有一定价值。
  【关键词】乳腺癌; miR-503; 血浆
  乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,我国女性乳腺癌的发病率与死亡率正逐年增加,严重威胁着妇女的健康。早期诊断和早期治疗是防治乳腺癌和降低死亡率的最有效的办法。
  目前应用于临床诊断乳腺癌的肿瘤标志物主要有癌胚抗原(CEA)和糖类抗原153(CA153)等,但这些肿瘤标志物在乳腺癌的早期中效能较差[1],难以满足早期诊断的需求。微小RNA(microRNA,miRNA)是一类长度约18-25bp的内源性非编码小分子RNA。研究发现在乳腺癌与正常人中存在着差异表达的miRNA,这些差异表达的miRNA在乳腺癌的早期诊断中有较高效能[1]。miR-503为miRNA家族中的一员,不少研究报道miR-503在不同细胞及组织中的差异表达。本研究的主要目的是通过应用实时定量RT-PCR检测乳腺癌患者血浆与正常人群血浆中miR-503的表达水平,分析miRNA-503在乳腺癌患者血浆中的表达水平与正常人的差异,为miR-503有希望作为乳腺癌辅助诊断的分子标志物提供实验依据。
  1 材料与方法
  1.1研究对象
  选择宁波市妇女儿童医院乳腺癌住院患者20例(女性,年龄51.18±5.37岁)和15例健康体检者(女性,年龄50.13±4.77岁)作为研究对象(两组研究对象年龄差异无统计学意义(P>0.05)。所有患者均经宁波市临床病理诊断中心确诊。收集各研究对象的外周静脉血3ml至EDTA抗凝试管,3000转/分离心10分钟,取上层血浆于1.5mlEP管。所有血浆标本放于-20°C冰箱冻存待測。
  1.2 主要试剂及仪器
  RNA提取试剂为美国Ambion产品Trizol LS reagent;逆转录试剂盒、实时荧光定量PCR试剂盒、U6及miR-300特异RT及PCR引物均购于宝生物工程有限公司(大连TAKARA公司)。实时定量PCR仪为美国Stratagene的 MX3005P PCR自动系列化分析仪。
  1.3 方法
  1.3.1血浆总RNA提取及含量测定
  使用抽提RNA试剂Trizol LS reagent抽提各样本血浆总RNA,具体操作按照说明书进行。抽提的RNA溶解于10 μl DEPC水中。使用分光光度计测定提取的RNA样品260 nm和280 nm的吸收值,分析RNA的纯度。OD260 / OD280在1.8~2.0时RNA纯度较高。计算提取的RNA含量。
  1.3.2逆转录反应及实时荧光定量PCR检测miRNA-503的水平
  使用逆转录试剂盒将总RNA逆转录为cDNA,按厂家说明书进行操作。以逆转录的cDNA为模板,用荧光定量PCR技术检测miRNA-503的表达水平。每一样品设3个复孔,取其平均值,以U6为内参,分别扩增miRNA和U6小RNA,用Mx5035P QPCR System进行反应。Ct值为扩增产物达到临界阈值时所对应的循环数。ΔCt = Ct miRNA - Ct U6;ΔΔCt = ΔCt实验组 - ΔCt对照组。以2-△Ct表示miR-503的相对表达水平,最后以2-△△Ct表示实验组miR-503的表达水平相对于对照组的差异倍数。
  1.3.3 统计分析
  数据采用SPSS 22.0统计软件分析,数据用平均数±标准差(mean ± SD)表示,样本均数比较采用独立样本t检验,实验至少重复3次,P < 0.05认为有统计学意义。
  2 结果
  统计20例乳腺癌患者2-△Ct结果显示,20例乳腺癌患者血浆中miR-503的相对表达水平为0.075±0.05,同样方法得出对照组血浆中miR-503的相对表达水平为0.272±0.12,与正常人相比,乳腺癌患者血浆中miR-503的表达水平明显下调,差异有统计学意义(P=0.001)。通过2-△△Ct得出20例乳腺癌患者血浆中miR-503的表达水平相对于对照组的0.244,即对照组的miR-503的表达水平为实验组的4.10倍。若以对照组血浆中miR-503的相对表达水平的均数0.272为正常人血浆miR-503的标准表达水平,20例乳腺癌中有19例乳腺癌患者血浆中的miR-503表达水平不到正常人的1/2。具体结果见图1。
  3 讨论
  miRNA是人体内广泛存在的非编码小分子RNA,与人类肿瘤的发生、发展以及侵袭转移等密切相关,在人类肿瘤的发生和发展、侵袭转移等扮演着重要角色。miRNA与乳腺癌的发生发展、侵袭转移有关,另外miRNA在乳腺癌的诊断和预后判断等方面的作用也受到研究者的关注[2]。
  miR-503为miRNA家族中的一员,可通过不同作用机制在多种癌症如肺癌、乳腺癌、结直肠癌、胃癌、肝癌、前列腺癌等的发生发展、侵袭、转移及治疗等方面发挥着重要的作用。已有研究表明miR-503在不同癌组织中有异常表达,与正常的癌旁组织及正常细胞相比,miR-503在许多癌组织及癌细胞中表达水平明显下降,如肺癌[3]、胃癌[4]等。但也有研究发现与癌旁正常组织相比miR-503在癌组织中的表达水平明显升高,如研究者发现miR-503在食管鳞癌[5]中表达上调,发挥促癌作用。由此可见miR-503在不同癌组织及癌细胞中存在着表达水平的差异,这提示miR-503可能参与许多癌症的发生和发展,在癌症的发生发展过程中可能发挥抑癌或促癌作用。   本研究发现miR-503在乳腺癌患者血浆中表达水平明显下调,与正常人相比,miR-503在乳腺癌血浆中的表达仅为正常人的0.244。本研究将为miR-503有希望作为乳腺癌辅助诊断的分子标志物提供了可能性。但是本研究还存在着不足,如病例标本数量不多,非大样本量的研究,实验结果是否存在一定偏差等,需扩大病例标本数量、结合患者的临床表现进行进一步的研究等。
  参考文献
  [1]姚颖,陆奎英,张敏,等.miR-10b与乳腺癌相关肿瘤标志物在早期乳腺癌中诊断效能比较.国际检验医学杂志,2020,41(3):310-317
  [2]Hamam R, Hamam D, Alsaleh KA,et al. Circulating microRNAs in breast cancer: novel diagnostic and prognostic biomarkers. Cell Death Dis. 2017,8(9):e3045.
  [3]Wei Y, Liao Y, Deng Y, et al. MicroRNA-503 Inhibits Non-Small Cell Lung Cancer Progression By Targeting PDK1/PI3K/AKT Pathway. Onco Targets Ther. 2019,12:9005-9016.
  [4]Li W, Li J, Mu H, et al. MiR-503 suppresses cell proliferation and invasion of gastric cancer by targeting HMGA2 and inactivating WNT signaling pathway. Cancer Cell Int. 19:164.
  [5]Liu ZH, Chen LD, He YB, et al. Study of expression levels and clinical significance of miR-503 and miR-375 in patients with esophageal squamous cell carcinoma. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 2019,23(9):3799-3805.
  基金項目:
  浙江省教育厅一般科研项目(编号:Y201534751)
  作者简介:
  龙香娥(1984-),女,湖南邵阳,硕士,讲师,研究方向:从事肿瘤分子生物学研究。
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