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【摘要】目的：建立止咳药品中橙皮苷的含量的高效液相测定方法。方法：色谱柱：ODS-C18（4.6mm×250mm，5μm），流动相：甲醇-水-醋酸（40：55：5），流速：1.0ml·min-1检测波长285nm，柱温：30℃。结果：橙皮苷在0.46～1.97μg/ml浓度范围内呈现良好线性关系（r=0.9996）， 百部止咳糖浆中橙皮苷含量为（19.1±2.1）ug.ml-1。结论：高效液相法测定橙皮苷的含量具有准确性高、精密程度好、有良好的线性关系，可考虑作为小儿百部止咳糖浆中橙皮苷含量测定方法，且可考虑在同类药物中推广。
【关键词】高效液相色谱法；止咳药品；橙皮苷；百部止咳糖浆
【中图分类号】R-1 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801（2015）06-0237-01
小儿百部止咳糖浆由百部、陈皮、杏仁、桑白皮等11味中药组成的中药复方制剂，具有化痰通络、清热解毒等功效，目前多用于小儿肺热咳喘及痰多等治疗[1]。方中主要成分之一的橙皮苷为二氢黄酮衍生物中的一种，能够抗菌、抗氧化、抗癌，还可以对免疫力进行调节。根据大量研究结果显示，黄酮类化合物主要有两种作用，促进氧化作用和抗氧化作用[2]，橙皮苷的促氧化作用特别强，能够诱导人类基因发生毒害变化。目前经常使用分光光度法及高效液相色谱法来测定药品中的橙皮苷，以此来控制药品质量[3]。目前对于止咳药品中橙皮苷含量测定尚不多见，为探究此类药品中橙皮苷含量，本文以小儿百部止咳糖浆为例，探究高效液相色谱法测定止咳类药物中的橙皮苷含量，现报道如下：
1.材料与方法
1.1实验仪器及材料
1.1.1仪器
色谱仪选择Prostar325型高效液相色譜仪，供货商为美国的Varian公司；清洗器选择型号为KQ-250的超声波清洗器，供货商为昆山市的超声仪器有限公司；选择型号是BS110S的电子天平，供货商为北京的赛多利斯有限公司；选择型号是Cary 50的分光光度计，供货商为美国的Varian公司。
1.1.2试剂及材料
橙皮苷（中国药品研究所提供，批号：20150211，含量98.0%），甲醇为色谱纯（国药集团化学试剂有限公司），冰醋酸为分析纯（国药集团化学试剂有限公司）。实验药品为小儿百咳静止咳糖浆（四川天诚制药有限公司提供，批号：20141211-20150811）。
1.2方法
1.2.1对照品溶液制备方法
选择50ml的容量瓶，橙皮苷对照品于105℃干燥后，经十万分位天平秤取11.01mg，转移入容量瓶后，取适量甲醇，混合均匀溶液澄清即可，然后选择10ml容量瓶，取1.5ml的溶液加进去，再次加甲醇，到达刻度线即可，混合均匀，最终获得的溶液为对照品溶液（220.4ug/ml）。
1.2.2样品溶液的制备方法
取止咳药品5ml，将甲醇10ml加入其中进行混合，完成后超声处理15min，之后进行抽滤 5次，将获得的滤液进行混合，容器需要使用少许甲醇溶液反复清洗，清洗液和滤液混合在一起倒入容量瓶中，最后将甲醇50ml加入其中获得供试品溶液。
1.2.3分析方法
测量橙皮苷的最大吸收波长：使用仪器为紫外可见分光光度计，首先使用精密天平秤取10mg的对照品，倒入甲醇溶液将对照品进行稀释，使最终溶液为100ml，之后选取50ml容量瓶，抽取5ml稀释液加入其中，然后加入甲醇，达到刻度处停止。在紫外分光光度计上进行全波长扫描，经图谱分析得最大吸收峰波长是285nm，选取285nm波段进行液相分析，发现杂质干扰少适宜于本次含量测定。
色谱条件：ODS-C18（4.6mm×250mm，5μm），流动相：甲醇-水-醋酸（40：55：5），流速：1.0ml·min-1检测波长285nm，柱温：30℃
1.2.4方法学考察
按照药典方法进行精密度、稳定性、重复性考察，所得RSD分别是1.1%、0.9%、1.2%，均符合标准，另选择50ml容量瓶，用仪器秤取橙皮苷对照品10mg加入其中，然后将甲醇加进去达到刻度处停止，混合均匀，选择25ml容量瓶，取出不同剂量的混合液，加入甲醇，混合均匀，参考色谱条件，选择20ul样品，记录色谱锋面积，最后能够获得对照品色谱图。制作坐标图，纵坐标为峰面积，横坐标为浓度，进行线性回顾分析，得到回归方程为：Y=64623X - 5412，相关性r =0.9996，表明，橙皮苷含量在0.46～1.97μg/ml范围与峰面积具有很好线性关系。
2.结果
采用高效液测定结果显示，川贝枇杷糖浆及强力枇杷露不含橙皮苷，其余止咳药品橙皮苷含量大小依次为半夏止咳糖浆、百咳静糖浆及雪梨膏，具体情况见表1：
3.讨论
本次实验所选方法准确性高、精密度好、重现性和相关性均符合相关要求，所得小儿百部止咳糖浆中，橙皮苷含量（19.34±0.18）ug/ml。结果提示，高效液相法测定橙皮苷的含量具有准确性高、精密程度好、有良好的线性关系，可考虑作为小儿百部止咳糖浆中橙皮苷含量测定方法，且可考虑在同类药物中推广。
参考文献：
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].一部.北京：化学工业出版社，2010.480.
[2]宋慧. 高效液相色谱法测定止咳药品中橙皮苷的含量[J]. 北方药学， 2015， 12（8）： 9-10.
[3]徐端琼. 高效液相色谱法测定补中益气丸中橙皮苷的含量[J]. 海峡药学， 2007， 19（3）： 48-50.
【关键词】高效液相色谱法；止咳药品；橙皮苷；百部止咳糖浆
【中图分类号】R-1 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801（2015）06-0237-01
小儿百部止咳糖浆由百部、陈皮、杏仁、桑白皮等11味中药组成的中药复方制剂，具有化痰通络、清热解毒等功效，目前多用于小儿肺热咳喘及痰多等治疗[1]。方中主要成分之一的橙皮苷为二氢黄酮衍生物中的一种，能够抗菌、抗氧化、抗癌，还可以对免疫力进行调节。根据大量研究结果显示，黄酮类化合物主要有两种作用，促进氧化作用和抗氧化作用[2]，橙皮苷的促氧化作用特别强，能够诱导人类基因发生毒害变化。目前经常使用分光光度法及高效液相色谱法来测定药品中的橙皮苷，以此来控制药品质量[3]。目前对于止咳药品中橙皮苷含量测定尚不多见，为探究此类药品中橙皮苷含量，本文以小儿百部止咳糖浆为例，探究高效液相色谱法测定止咳类药物中的橙皮苷含量，现报道如下：
1.材料与方法
1.1实验仪器及材料
1.1.1仪器
色谱仪选择Prostar325型高效液相色譜仪，供货商为美国的Varian公司；清洗器选择型号为KQ-250的超声波清洗器，供货商为昆山市的超声仪器有限公司；选择型号是BS110S的电子天平，供货商为北京的赛多利斯有限公司；选择型号是Cary 50的分光光度计，供货商为美国的Varian公司。
1.1.2试剂及材料
橙皮苷（中国药品研究所提供，批号：20150211，含量98.0%），甲醇为色谱纯（国药集团化学试剂有限公司），冰醋酸为分析纯（国药集团化学试剂有限公司）。实验药品为小儿百咳静止咳糖浆（四川天诚制药有限公司提供，批号：20141211-20150811）。
1.2方法
1.2.1对照品溶液制备方法
选择50ml的容量瓶，橙皮苷对照品于105℃干燥后，经十万分位天平秤取11.01mg，转移入容量瓶后，取适量甲醇，混合均匀溶液澄清即可，然后选择10ml容量瓶，取1.5ml的溶液加进去，再次加甲醇，到达刻度线即可，混合均匀，最终获得的溶液为对照品溶液（220.4ug/ml）。
1.2.2样品溶液的制备方法
取止咳药品5ml，将甲醇10ml加入其中进行混合，完成后超声处理15min，之后进行抽滤 5次，将获得的滤液进行混合，容器需要使用少许甲醇溶液反复清洗，清洗液和滤液混合在一起倒入容量瓶中，最后将甲醇50ml加入其中获得供试品溶液。
1.2.3分析方法
测量橙皮苷的最大吸收波长：使用仪器为紫外可见分光光度计，首先使用精密天平秤取10mg的对照品，倒入甲醇溶液将对照品进行稀释，使最终溶液为100ml，之后选取50ml容量瓶，抽取5ml稀释液加入其中，然后加入甲醇，达到刻度处停止。在紫外分光光度计上进行全波长扫描，经图谱分析得最大吸收峰波长是285nm，选取285nm波段进行液相分析，发现杂质干扰少适宜于本次含量测定。
色谱条件：ODS-C18（4.6mm×250mm，5μm），流动相：甲醇-水-醋酸（40：55：5），流速：1.0ml·min-1检测波长285nm，柱温：30℃
1.2.4方法学考察
按照药典方法进行精密度、稳定性、重复性考察，所得RSD分别是1.1%、0.9%、1.2%，均符合标准，另选择50ml容量瓶，用仪器秤取橙皮苷对照品10mg加入其中，然后将甲醇加进去达到刻度处停止，混合均匀，选择25ml容量瓶，取出不同剂量的混合液，加入甲醇，混合均匀，参考色谱条件，选择20ul样品，记录色谱锋面积，最后能够获得对照品色谱图。制作坐标图，纵坐标为峰面积，横坐标为浓度，进行线性回顾分析，得到回归方程为：Y=64623X - 5412，相关性r =0.9996，表明，橙皮苷含量在0.46～1.97μg/ml范围与峰面积具有很好线性关系。
2.结果
采用高效液测定结果显示，川贝枇杷糖浆及强力枇杷露不含橙皮苷，其余止咳药品橙皮苷含量大小依次为半夏止咳糖浆、百咳静糖浆及雪梨膏，具体情况见表1：
3.讨论
本次实验所选方法准确性高、精密度好、重现性和相关性均符合相关要求，所得小儿百部止咳糖浆中，橙皮苷含量（19.34±0.18）ug/ml。结果提示，高效液相法测定橙皮苷的含量具有准确性高、精密程度好、有良好的线性关系，可考虑作为小儿百部止咳糖浆中橙皮苷含量测定方法，且可考虑在同类药物中推广。
参考文献：
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].一部.北京：化学工业出版社，2010.480.
[2]宋慧. 高效液相色谱法测定止咳药品中橙皮苷的含量[J]. 北方药学， 2015， 12（8）： 9-10.
[3]徐端琼. 高效液相色谱法测定补中益气丸中橙皮苷的含量[J]. 海峡药学， 2007， 19（3）： 48-50.