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目的:构建铜绿假单胞菌PAO1的waaL基因缺失株,并通过在缺失株中建立糖基化系统,合成糖蛋白。方法:采用同源双交换法敲除铜绿假单胞菌PAO1株脂多糖合成途径中的O-抗原连接酶基因waaL,并利用PCR和脂多糖银染对敲除株的基因型和表型进行验证;随后导入可共表达糖基转移酶PglL和重组霍乱毒素B亚单位(rCTB)的糖基工程载体,经IPTG诱导后利用免疫印迹检测糖蛋白的表达情况。结果:PCR和脂多糖银染鉴定表明敲除了PAO1的waaL基因,缺失株和野生株的生长状态及糖代谢情况几乎无差异;在缺失株中导入糖基工