目的建立氢溴酸山莨菪碱注射液有关物质及含量测定的方法。方法采用高效液相色谱法,色谱柱为Intersil ODS-3 C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以0.01 mol·L?1磷酸二氢钾溶液(含0.15%三乙胺,用磷酸调节pH值至6.5)-甲醇(70∶30)为流动相,柱温为35℃,流速1.0 mL·min?1,检测波长为220 nm。结果氢溴酸山莨菪碱与阿托品、托品酸及其他强制破坏产生的降解产物峰分离度良好;氢溴酸山莨菪碱在0.25~2.5 mg·mL?1(r=1.000)、托品酸及阿托品在1~100μg·mL?1(r=0.999)内线性关系良好;氢溴酸山莨菪碱检出限为为0.2 ng,阿托品及托品酸均为0.05 ng;氢溴酸山莨菪碱定量限为0.7 ng,阿托品及托品酸均为0.17 ng。氢溴酸山莨菪碱、阿托品、托品酸高、中、低3种浓度的平均回收率均在99.5%~100.8%内,RSD<0.8%。结论建立的液相色谱法快速、准确、专属性强,可用于氢溴酸山莨菪碱注射液的含量测定和有关物质检查。