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关键词：QuECHERS;LC-MS/MS;快速检测;番茄;农药残留
随着生活水平的提高，人们的饮食消费需求逐渐从解决温饱向质量安全、营养方向转变。农药残留是现阶段关于农产品的一个关注热点，由于农产品具有保质期短、不易保存等特点，因此在监管过程中须要快速对其质量安全指标进行快速检测分析，以便于执法。但目前国家标准所规定的对农产品农药残留进行的检测方法前处理过程繁琐，不易快速筛查，且因标准制定较早，新药上市后，国家标准方法更新滞后，不利于对产品进行快速筛查。
目前检测农药残留的方法众多，常见的有气相色谱法（GC）[1]、液相色谱法（LC）[2]、气质联用法[3]、液质联用（LC-MS）法[4]等。不同的检测方法及标准各有优缺点，前处理过程繁琐及仪器分析时间长是这些方法常见的突出问题，不易于大批量样品的快速检测分析。黄霞等建立了柑橘中常见的50种农药残留的气相色谱/质谱（GC/MS）检测方法，平均回收率为 72.0%～118.2%，相对标准偏差（RSD）为1.7%～19.7%[5]。刘冰等采用QuEChERS（quick、easy、cheap、effective、rugged、safe）方法对试样进行前处理后，再采用质谱法进行农药残留检测分析，建立了同时测定蔬菜水果中31种农药残留的方法，回收率在72%～128%之间，RSD为4.2%～9.9%[6]。余璐等将茶叶样品用乙腈提取后，采用石墨化碳黑（Carb）-乙二胺基-N-丙基（PSA）萃取小柱进行净化，然后通过仪器检测比对分析，建立了茶叶中204种农药残留的超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱（UPLC-Q-TOF/MS）快速筛查法[7]。本研究建立了番茄中多种农药残留分析方法，旨在为水果蔬菜中农药残留的快速筛查分析提供一定的技术方法支撑。
1 材料与方法
1.1 主要仪器、试剂与材料
液相色谱质谱仪[Aglient1200-6410，安捷伦科技（中国）有限公司];电子天平[BSA124S-CW，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司];低速离心机（湘仪L550，湖南湘仪实验室仪器开发有限公司）;高速离心机（TG16W，长沙平凡仪器仪表有限公司）。
甲醇、乙腈（Merck公司产品）;农药标准品（抗蚜威、3-羟基克百威、噻虫啉、克百威、甲萘威、甲霜灵、嘧霉胺、咪鲜胺、杀扑磷、灭线磷、马拉硫磷、氯唑磷、三唑磷、虫酰肼、苯醚甲环唑、治螟磷、二甲戊灵、阿维菌素），由农业农村部环境保护科研监测所提供;番茄样品为市售。
1.2 试验方法
1.2.1 样品前处理 称取15.00 g番茄样品置于50 mL塑料离心管中，加入15 mL 1%醋酸乙腈溶液，涡旋，超声提取15 min，加入盐析包及小磁石，迅速摇匀后，置于冰水中快速冷却，然后剧烈振摇 10 min，在4 000 r/min条件下离心5 min，静置片刻，吸取1.5 mL离心上清液置于2 mL QuEchERS净化管中，涡漩振荡1 min，在12 000 r/min条件下离心2 min，过0.22 μm有机相滤膜，备用。
1.2.2 标准曲线配制 称取5个阴性样品，按照“1.2.1”节中的方法进行处理，取8 mL进行净化，离心后合并净化液，用于标准溶液配制。分别取18种浓度均为100 μg/mL的农药标准品0.50 mL置于10 mL容量瓶中，用甲醇定容，得到浓度为 5.00 μg/mL 的标准储备液，取濃度为 5.00 μg/mL 的标准储备液0.4 mL置于10 mL容量瓶中，用甲醇定容，得到200 ng/mL稀释液。然后分别取 200 ng/mL 稀释液0.15、0.50、1.00、2.00、2.50 mL 置于5 mL容量瓶，用空白基质定容，得浓度分别为0.006、0.020、0.040、0.080、0.10 μg/mL的溶液。
1.2.3 色谱条件 色谱柱：Agilent Zorbax-C18柱（3.0 mm×100 mm，2.7 μm）;流动相用0.1%甲酸乙腈（A）和0.002 mol/L乙酸铵水溶液（B）进行梯度洗脱，淋洗梯度：0～1 min（95% 5%）;1.0～1.5 min（50% 50%）;1.5～3.0 min（40% 60%）;3～5 min（5% 95%）;5～7 min（5% 95%）;7～8 min（95% 5%）。流速为0.3 mL/min，进样量为10 μL，柱温40 ℃。
1.2.4 质谱条件 离子检测方式为多反应离子检测（MRM）和子离子扫描，极性为正离子（positive），离子化方式为电喷雾离子化（ESI），毛细管电压为 4 000 V，干燥气温度为330 ℃，干燥气流速为 8.0 L/min，雾化气压力为40 psi。其他质谱条件详见表1。
2 结果与分析
2.1 LC-MS/MS总离子流图
在“1.2.3”“1.2.4”节条件下测得，18种农药总离子流图和样品空白图见图1，不同农药提取离子色谱见图2。
因仪器的灵敏度较高，低含量目标物受到的干扰较大，须用不同基质对同类样品提取目标物进行基质配标校正，以降低基质效应，保证结果的准确性。从图1可以看出，该方法在5.5 min内即可完成对18种农药残留的检测，因目标化合物保留时间比较接近，所以总离子流图出现峰重叠现象，但提取离子色谱图后，峰型良好，不影响定性、定量分析结果，同时，氯唑磷和三唑磷保留时间与母离子基本相同，因此通过优化后可用质荷比（m/z）为286的离子峰辅助氯唑磷定性。
2.2 检测方法的线性范围及检出限
通过基质配标，上仪器分析后，不同化合物在0.006～0.100 μg/mL浓度范围内的线性方程及相关系数见表2。同时，按3倍信噪比（S/N）计算检测方法检出限。
2.3 检测方法的回收率及实验室内的变异系数 称取18份阴性样品，设置3个添加水平（8、50、100 μg/kg），每个水平设6个平行，检测结果见表2。
从表2可以看出，采用本研究方法检测18种农药残留得到的回归方程线性良好，相关系数均在 0.995 9～0.999 9间，不同添加水平的回收率均在70.1%～128.9%，变异系数在0.2%～12.6%，回收率及变异系数满足实验室质量控制规范要求，证明了本研究方法具有可行性。
3 结论
通过Quechers前处理技术与LC-MS/MS结合的方法，建立了对番茄中18种农药残留快速检测的方法，采用3个添加水平的农药对该方法进行验证，结果表明，该方法测定的结果稳定，灵敏度高，重复性好，能满足日常检测工作需要。
参考文献：
[1]吴福中，王锦海，刘志红，等. 气相色谱法测定蔬菜中7种有机磷农药残留[J]. 中国农学通报，2009，25（19）：59-61.
[2]马纪伟，闫冬良. HPLC法测定猕猴桃中氨基甲酸酯类农药残留量[J]. 安徽农业科学，2008，36（26）：11195-11196.
[3]赵晓萌，于同泉，朱高群，等. 气相色谱-质谱法检测蔬菜和水果中35种农药残留[J]. 色谱，2005，23（3）：328.
[4]邓立刚，李增梅，郭长英，等. 超高效液相色谱-串联质谱法测定蔬菜中7种氨基甲酸酯类农药残留[J]. 食品科学，2011，32（6）：221-224.
[5]黄 霞，宋 莹，张耀海，等. QuEChERS-GC/MS快速检测柑橘中50种农药残留[J]. 食品科学，2011，32（18）：268-273.
[6]刘 冰，刘全科，周 扬，等. QuEChERS/LC-MS-MS快速测定蔬菜水果中31种氨基甲酸酯类农药残留[J]. 湖北植保，2016（4）：31-34.
[7]余 璐，宋 伟，吕亚宁，等. 超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法快速筛查茶叶中的204种农药残留[J]. 色谱，2015，33（6）：597-612.王发勇，牛绍辉，徐 超，等. 基于烟片结构和保香加工的润叶参数模式筛选[J].
随着生活水平的提高，人们的饮食消费需求逐渐从解决温饱向质量安全、营养方向转变。农药残留是现阶段关于农产品的一个关注热点，由于农产品具有保质期短、不易保存等特点，因此在监管过程中须要快速对其质量安全指标进行快速检测分析，以便于执法。但目前国家标准所规定的对农产品农药残留进行的检测方法前处理过程繁琐，不易快速筛查，且因标准制定较早，新药上市后，国家标准方法更新滞后，不利于对产品进行快速筛查。
目前检测农药残留的方法众多，常见的有气相色谱法（GC）[1]、液相色谱法（LC）[2]、气质联用法[3]、液质联用（LC-MS）法[4]等。不同的检测方法及标准各有优缺点，前处理过程繁琐及仪器分析时间长是这些方法常见的突出问题，不易于大批量样品的快速检测分析。黄霞等建立了柑橘中常见的50种农药残留的气相色谱/质谱（GC/MS）检测方法，平均回收率为 72.0%～118.2%，相对标准偏差（RSD）为1.7%～19.7%[5]。刘冰等采用QuEChERS（quick、easy、cheap、effective、rugged、safe）方法对试样进行前处理后，再采用质谱法进行农药残留检测分析，建立了同时测定蔬菜水果中31种农药残留的方法，回收率在72%～128%之间，RSD为4.2%～9.9%[6]。余璐等将茶叶样品用乙腈提取后，采用石墨化碳黑（Carb）-乙二胺基-N-丙基（PSA）萃取小柱进行净化，然后通过仪器检测比对分析，建立了茶叶中204种农药残留的超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱（UPLC-Q-TOF/MS）快速筛查法[7]。本研究建立了番茄中多种农药残留分析方法，旨在为水果蔬菜中农药残留的快速筛查分析提供一定的技术方法支撑。
1 材料与方法
1.1 主要仪器、试剂与材料
液相色谱质谱仪[Aglient1200-6410，安捷伦科技（中国）有限公司];电子天平[BSA124S-CW，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司];低速离心机（湘仪L550，湖南湘仪实验室仪器开发有限公司）;高速离心机（TG16W，长沙平凡仪器仪表有限公司）。
甲醇、乙腈（Merck公司产品）;农药标准品（抗蚜威、3-羟基克百威、噻虫啉、克百威、甲萘威、甲霜灵、嘧霉胺、咪鲜胺、杀扑磷、灭线磷、马拉硫磷、氯唑磷、三唑磷、虫酰肼、苯醚甲环唑、治螟磷、二甲戊灵、阿维菌素），由农业农村部环境保护科研监测所提供;番茄样品为市售。
1.2 试验方法
1.2.1 样品前处理 称取15.00 g番茄样品置于50 mL塑料离心管中，加入15 mL 1%醋酸乙腈溶液，涡旋，超声提取15 min，加入盐析包及小磁石，迅速摇匀后，置于冰水中快速冷却，然后剧烈振摇 10 min，在4 000 r/min条件下离心5 min，静置片刻，吸取1.5 mL离心上清液置于2 mL QuEchERS净化管中，涡漩振荡1 min，在12 000 r/min条件下离心2 min，过0.22 μm有机相滤膜，备用。
1.2.2 标准曲线配制 称取5个阴性样品，按照“1.2.1”节中的方法进行处理，取8 mL进行净化，离心后合并净化液，用于标准溶液配制。分别取18种浓度均为100 μg/mL的农药标准品0.50 mL置于10 mL容量瓶中，用甲醇定容，得到浓度为 5.00 μg/mL 的标准储备液，取濃度为 5.00 μg/mL 的标准储备液0.4 mL置于10 mL容量瓶中，用甲醇定容，得到200 ng/mL稀释液。然后分别取 200 ng/mL 稀释液0.15、0.50、1.00、2.00、2.50 mL 置于5 mL容量瓶，用空白基质定容，得浓度分别为0.006、0.020、0.040、0.080、0.10 μg/mL的溶液。
1.2.3 色谱条件 色谱柱：Agilent Zorbax-C18柱（3.0 mm×100 mm，2.7 μm）;流动相用0.1%甲酸乙腈（A）和0.002 mol/L乙酸铵水溶液（B）进行梯度洗脱，淋洗梯度：0～1 min（95% 5%）;1.0～1.5 min（50% 50%）;1.5～3.0 min（40% 60%）;3～5 min（5% 95%）;5～7 min（5% 95%）;7～8 min（95% 5%）。流速为0.3 mL/min，进样量为10 μL，柱温40 ℃。
1.2.4 质谱条件 离子检测方式为多反应离子检测（MRM）和子离子扫描，极性为正离子（positive），离子化方式为电喷雾离子化（ESI），毛细管电压为 4 000 V，干燥气温度为330 ℃，干燥气流速为 8.0 L/min，雾化气压力为40 psi。其他质谱条件详见表1。
2 结果与分析
2.1 LC-MS/MS总离子流图
在“1.2.3”“1.2.4”节条件下测得，18种农药总离子流图和样品空白图见图1，不同农药提取离子色谱见图2。
因仪器的灵敏度较高，低含量目标物受到的干扰较大，须用不同基质对同类样品提取目标物进行基质配标校正，以降低基质效应，保证结果的准确性。从图1可以看出，该方法在5.5 min内即可完成对18种农药残留的检测，因目标化合物保留时间比较接近，所以总离子流图出现峰重叠现象，但提取离子色谱图后，峰型良好，不影响定性、定量分析结果，同时，氯唑磷和三唑磷保留时间与母离子基本相同，因此通过优化后可用质荷比（m/z）为286的离子峰辅助氯唑磷定性。
2.2 检测方法的线性范围及检出限
通过基质配标，上仪器分析后，不同化合物在0.006～0.100 μg/mL浓度范围内的线性方程及相关系数见表2。同时，按3倍信噪比（S/N）计算检测方法检出限。
2.3 检测方法的回收率及实验室内的变异系数 称取18份阴性样品，设置3个添加水平（8、50、100 μg/kg），每个水平设6个平行，检测结果见表2。
从表2可以看出，采用本研究方法检测18种农药残留得到的回归方程线性良好，相关系数均在 0.995 9～0.999 9间，不同添加水平的回收率均在70.1%～128.9%，变异系数在0.2%～12.6%，回收率及变异系数满足实验室质量控制规范要求，证明了本研究方法具有可行性。
3 结论
通过Quechers前处理技术与LC-MS/MS结合的方法，建立了对番茄中18种农药残留快速检测的方法，采用3个添加水平的农药对该方法进行验证，结果表明，该方法测定的结果稳定，灵敏度高，重复性好，能满足日常检测工作需要。
参考文献：
[1]吴福中，王锦海，刘志红，等. 气相色谱法测定蔬菜中7种有机磷农药残留[J]. 中国农学通报，2009，25（19）：59-61.
[2]马纪伟，闫冬良. HPLC法测定猕猴桃中氨基甲酸酯类农药残留量[J]. 安徽农业科学，2008，36（26）：11195-11196.
[3]赵晓萌，于同泉，朱高群，等. 气相色谱-质谱法检测蔬菜和水果中35种农药残留[J]. 色谱，2005，23（3）：328.
[4]邓立刚，李增梅，郭长英，等. 超高效液相色谱-串联质谱法测定蔬菜中7种氨基甲酸酯类农药残留[J]. 食品科学，2011，32（6）：221-224.
[5]黄 霞，宋 莹，张耀海，等. QuEChERS-GC/MS快速检测柑橘中50种农药残留[J]. 食品科学，2011，32（18）：268-273.
[6]刘 冰，刘全科，周 扬，等. QuEChERS/LC-MS-MS快速测定蔬菜水果中31种氨基甲酸酯类农药残留[J]. 湖北植保，2016（4）：31-34.
[7]余 璐，宋 伟，吕亚宁，等. 超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法快速筛查茶叶中的204种农药残留[J]. 色谱，2015，33（6）：597-612.王发勇，牛绍辉，徐 超，等. 基于烟片结构和保香加工的润叶参数模式筛选[J].