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[摘 要]人类的条件性致病真菌白色念珠菌存在于人体肠道，泌尿生殖道和在皮肤上。大多数有白色念珠菌引起的感染与其生物膜有关。因此，我们致力于寻找不同种类药物的联合应用可有效清除生物膜的方法，来降低有效药物的剂量。在文章中，我们综述了最近发现的可以抗白色念珠菌生物膜且具有协同作用的化合药物。
[关键词]白色念珠菌、药物协同作用、生物膜
中图分类号：TJ422 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2017）03-0146-01
白色念珠菌是条件性致病真菌，病原体存在于人体肠道，泌尿生殖道和在皮肤上。包括健康人在内的大约有50%的人的粘膜被白色念珠菌侵染。尽管在与真菌生物膜有关的人类疾病中，其他种类的真菌也是形成生物膜，但是白色念球菌居全国之首。大量调查表明，与浮游生长的白色念珠菌相比，附着在生物膜表面的白色念珠菌对传统的抗真菌药物有更強的抵抗力。鉴于生物膜状态菌的耐药性， 目前对于生物膜感染很少采用单种药物的治疗， 一般采用抗菌药-抗菌药、抗菌药-非抗菌药的协同作用， 以求最佳的治疗效果。本文对近年来药物协同抗白色念珠菌生物膜研究进展作一综述。
1 与唑类组合
1.1 植物衍生的化合物
一些可以提高唑类抗真菌活性的天然化合物被发现。氟康唑与其他两种植物衍生的化合物组合时抵抗白色念珠菌生物膜的活性有所增强。在这项研究中发现，唑类与丁子香酚在体外的协同作用最显著。最近的研究证实丁香酚和氟康唑之间的协同作用能抑制白念珠菌生物膜的活性。此外，氟康唑与百里酚（多酚）的协同作用以及薄荷醇（单环醇）与氟康唑的协同作用也被证实。研究证明，在抗白色念珠菌生物膜生成过程中，生物碱小檗碱与咪康唑也具有协同作用。显然，黄连素可以抑制麦角甾醇合成酶，从而提高细胞膜的渗透性细胞膜的。此外，黄连可以促进三羧酸循环并抑制ATP合成酶活性，从而导致内源性ROS产生过多，进而导致菌细胞死亡[1]。
1.2 抗菌化合物
除了利用唑与其他植物衍生的化合物来协同抵抗白色念珠菌生物膜的活性外，研究还发现药品代理商还会提高唑的活性来抵抗白色念珠菌生物膜的生成。研究表明，米诺环素，四环素衍生物和已知的抗生素，能够增强氟康唑的抗生物膜的活性。这些四环素增强了氟康唑透过生物膜的渗透性，导致细胞内钙离子的损失和干扰钙离子的稳态。多西环素（DOX）为半合成四环素类抗生素，在抑制白色念珠菌生物膜形成中，与氟康唑联用产生协同作用。最近研究表明，氟康唑和多西环素之间的这种协同作用与外排泵基因CDR1，CDR2和MDR1表达量减少和细胞内钙离子浓度增加有关。这些数据及以前的研究，不仅说明了钙离子通道的阻遏增强了协同作用，还影射出了钙离子在这个模型中的作用方式[2]。
2 与棘白菌素组合
2.1 植物衍生的化合物
十肽OSIP108（MLCVLQ GLRE），是在拟南芥中被发现的，显示出可以干扰白色念珠菌生物膜的发展但不降低细胞生存力。此外，在抵抗白色念珠菌生物膜中，OSIP108与卡泊芬净具有协同效应。这些发现进一步转化到到体内模型，即线虫-白色念珠菌感染模型。结果表明，那些被白色念珠菌感染的线虫，使用OSIP108和卡泊芬净组合治疗的效果比使用卡泊芬净单独治疗的效果更显著[3]。
2.2 抗菌肽
AS10协同作用与卡泊芬净，以消除白色念珠菌生物膜。但是AS10本身不能消灭白念珠菌生物膜。Tyrocidine，抑菌环癸肽，是从芽孢杆菌中提纯得到的，被证明能够杀死白色念珠菌浮游细胞，还可以根除体外白色念珠菌生物膜。在体内进行的白色念珠菌—线虫活性感染实验测试中，发现它们还可以增强卡泊芬净的作用效果。这些抑菌环癸肽还可以干扰成熟细胞生物膜的完整性[4]。
3 与多烯的组合
3.1 植物衍生化合物
在体外，上述十肽OSIP108在对抗培养24小时的白色念珠菌生物膜中，与两性霉素B也具有协同作用。协同的程度与在卡泊芬净的情况下观察到协同作用相比大很多，虽然在体内没有得到进一步的验证。
3.2 抗微生物肽
上述CRAMP衍生肽AS10在抵抗白色念珠菌生物膜中，显示出对两性霉素B的活性的增强作用[2]。因为AS10还与卡泊芬净协同作用并抑制几种细菌的生物膜发育，而且不显示对人类细胞的毒性，所以AS10可能是一个有趣的先导分子，可以用来以防止或根除生物膜相关的感染。上述的短杆菌肽在抵抗白色念珠菌生物膜形成中，与两性霉素B具有协同作用，虽然对卡泊芬净的协同作用较少。
鉴于白色念珠菌生物膜的结构与功能特点， 单一药物很难将其彻底清除， 因此药物联合作用成为明智的选择。由于生物膜形成机制涉及ECM、群感效应、菌细胞黏附、生物膜成熟直至播散等诸多环节，药物协同效应可能是两种药物作用于同一环节或靶点， 或是不同药物作用于多个环节或靶点， 而致药物作用相加或增强。但药物协同对于生物膜形成过程中信号传导途径的影响、相关基因或蛋白表达谱的改变、对哪些靶点产生作用等目前尚缺乏细致研究。
参考文献
[1] Xu Y， Wang Y， Yan L， et al. Proteomic analysis reveals a synergistic mechanism of fluconazole and berberine against fluconazole-resistant Candida albicans：Endogenous ROS augmentation.J Proteome Res 2009；8：5296-304.
[2] Gao Y， Zhang C， Lu C， et al. Synergistic effect of doxycycline and fluconazole against Candida albicans biofilms and the impact of calcium channel blockers. FEMS Yeast Res 2013；13：453-62.
[3] Delattin N， De Brucker K， Craik DJ， et al.The plant-derived decapeptide OSIP108 interferes with Candida albicans biofilm formation without affecting cell viability. Antimicrob Agents Chemother 2014；58：2647-56.
[4] Troskie AM， Rautenbach M， Delattin N，et al. Synergistic activity of the tyrocidines，antimicrobial cyclodecapeptides from Bacillus aneurinolyticus， with amphotericin B and caspofungin against Candida albicans biofilms. Antimicrob Agents Chemother 2014；58：3697-707.
[关键词]白色念珠菌、药物协同作用、生物膜
中图分类号：TJ422 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2017）03-0146-01
白色念珠菌是条件性致病真菌，病原体存在于人体肠道，泌尿生殖道和在皮肤上。包括健康人在内的大约有50%的人的粘膜被白色念珠菌侵染。尽管在与真菌生物膜有关的人类疾病中，其他种类的真菌也是形成生物膜，但是白色念球菌居全国之首。大量调查表明，与浮游生长的白色念珠菌相比，附着在生物膜表面的白色念珠菌对传统的抗真菌药物有更強的抵抗力。鉴于生物膜状态菌的耐药性， 目前对于生物膜感染很少采用单种药物的治疗， 一般采用抗菌药-抗菌药、抗菌药-非抗菌药的协同作用， 以求最佳的治疗效果。本文对近年来药物协同抗白色念珠菌生物膜研究进展作一综述。
1 与唑类组合
1.1 植物衍生的化合物
一些可以提高唑类抗真菌活性的天然化合物被发现。氟康唑与其他两种植物衍生的化合物组合时抵抗白色念珠菌生物膜的活性有所增强。在这项研究中发现，唑类与丁子香酚在体外的协同作用最显著。最近的研究证实丁香酚和氟康唑之间的协同作用能抑制白念珠菌生物膜的活性。此外，氟康唑与百里酚（多酚）的协同作用以及薄荷醇（单环醇）与氟康唑的协同作用也被证实。研究证明，在抗白色念珠菌生物膜生成过程中，生物碱小檗碱与咪康唑也具有协同作用。显然，黄连素可以抑制麦角甾醇合成酶，从而提高细胞膜的渗透性细胞膜的。此外，黄连可以促进三羧酸循环并抑制ATP合成酶活性，从而导致内源性ROS产生过多，进而导致菌细胞死亡[1]。
1.2 抗菌化合物
除了利用唑与其他植物衍生的化合物来协同抵抗白色念珠菌生物膜的活性外，研究还发现药品代理商还会提高唑的活性来抵抗白色念珠菌生物膜的生成。研究表明，米诺环素，四环素衍生物和已知的抗生素，能够增强氟康唑的抗生物膜的活性。这些四环素增强了氟康唑透过生物膜的渗透性，导致细胞内钙离子的损失和干扰钙离子的稳态。多西环素（DOX）为半合成四环素类抗生素，在抑制白色念珠菌生物膜形成中，与氟康唑联用产生协同作用。最近研究表明，氟康唑和多西环素之间的这种协同作用与外排泵基因CDR1，CDR2和MDR1表达量减少和细胞内钙离子浓度增加有关。这些数据及以前的研究，不仅说明了钙离子通道的阻遏增强了协同作用，还影射出了钙离子在这个模型中的作用方式[2]。
2 与棘白菌素组合
2.1 植物衍生的化合物
十肽OSIP108（MLCVLQ GLRE），是在拟南芥中被发现的，显示出可以干扰白色念珠菌生物膜的发展但不降低细胞生存力。此外，在抵抗白色念珠菌生物膜中，OSIP108与卡泊芬净具有协同效应。这些发现进一步转化到到体内模型，即线虫-白色念珠菌感染模型。结果表明，那些被白色念珠菌感染的线虫，使用OSIP108和卡泊芬净组合治疗的效果比使用卡泊芬净单独治疗的效果更显著[3]。
2.2 抗菌肽
AS10协同作用与卡泊芬净，以消除白色念珠菌生物膜。但是AS10本身不能消灭白念珠菌生物膜。Tyrocidine，抑菌环癸肽，是从芽孢杆菌中提纯得到的，被证明能够杀死白色念珠菌浮游细胞，还可以根除体外白色念珠菌生物膜。在体内进行的白色念珠菌—线虫活性感染实验测试中，发现它们还可以增强卡泊芬净的作用效果。这些抑菌环癸肽还可以干扰成熟细胞生物膜的完整性[4]。
3 与多烯的组合
3.1 植物衍生化合物
在体外，上述十肽OSIP108在对抗培养24小时的白色念珠菌生物膜中，与两性霉素B也具有协同作用。协同的程度与在卡泊芬净的情况下观察到协同作用相比大很多，虽然在体内没有得到进一步的验证。
3.2 抗微生物肽
上述CRAMP衍生肽AS10在抵抗白色念珠菌生物膜中，显示出对两性霉素B的活性的增强作用[2]。因为AS10还与卡泊芬净协同作用并抑制几种细菌的生物膜发育，而且不显示对人类细胞的毒性，所以AS10可能是一个有趣的先导分子，可以用来以防止或根除生物膜相关的感染。上述的短杆菌肽在抵抗白色念珠菌生物膜形成中，与两性霉素B具有协同作用，虽然对卡泊芬净的协同作用较少。
鉴于白色念珠菌生物膜的结构与功能特点， 单一药物很难将其彻底清除， 因此药物联合作用成为明智的选择。由于生物膜形成机制涉及ECM、群感效应、菌细胞黏附、生物膜成熟直至播散等诸多环节，药物协同效应可能是两种药物作用于同一环节或靶点， 或是不同药物作用于多个环节或靶点， 而致药物作用相加或增强。但药物协同对于生物膜形成过程中信号传导途径的影响、相关基因或蛋白表达谱的改变、对哪些靶点产生作用等目前尚缺乏细致研究。
参考文献
[1] Xu Y， Wang Y， Yan L， et al. Proteomic analysis reveals a synergistic mechanism of fluconazole and berberine against fluconazole-resistant Candida albicans：Endogenous ROS augmentation.J Proteome Res 2009；8：5296-304.
[2] Gao Y， Zhang C， Lu C， et al. Synergistic effect of doxycycline and fluconazole against Candida albicans biofilms and the impact of calcium channel blockers. FEMS Yeast Res 2013；13：453-62.
[3] Delattin N， De Brucker K， Craik DJ， et al.The plant-derived decapeptide OSIP108 interferes with Candida albicans biofilm formation without affecting cell viability. Antimicrob Agents Chemother 2014；58：2647-56.
[4] Troskie AM， Rautenbach M， Delattin N，et al. Synergistic activity of the tyrocidines，antimicrobial cyclodecapeptides from Bacillus aneurinolyticus， with amphotericin B and caspofungin against Candida albicans biofilms. Antimicrob Agents Chemother 2014；58：3697-707.