【摘 要】
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目的 采用体外锚蛋白(AnkG)启动子介导荧光素酶报告基因活性的研究,探讨丙戊酸钠(VPA)对AnkG启动子活性的调控机制.方法 通过对人和小鼠的AnkG启动子序列进行比对分析,克隆小
【机 构】
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中国医学科学院北京协和医学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室
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目的 采用体外锚蛋白(AnkG)启动子介导荧光素酶报告基因活性的研究,探讨丙戊酸钠(VPA)对AnkG启动子活性的调控机制.方法 通过对人和小鼠的AnkG启动子序列进行比对分析,克隆小鼠AnkG启动子序列;将AnkG启动子片段克隆至荧光素酶报告基因(Luciferase)质粒pGL3,构建真核表达载体;采用脂质体Lipofectamine2000将重组质粒和空载体质粒分别与pRL-CMV共转染至N2a细胞和293T细胞,同时给予0、0.5、1.0 mmol/L的VPA处理12 h后,采用双荧光素酶法检测AnkG启动子片段在细胞中的转录活性及VPA处理后细胞中荧光素酶报告基因的活性.结果 酶切和测序鉴定证实AnkG启动子克隆及其表达载体构建成功;荧光素酶活性检测显示AnkG启动子在N2a和293T细胞中均有较高的转录活性;0.5 mmol/L VPA处理两种品系细胞12h后,Luciferase活性都明显上调.结论 VPA能够从转录水平调控AnkG启动子的活性,体内VPA对AnkG表达的调控可能是直接在转录水平进行的.
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