【摘 要】
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目的：为提高COVID-19检测灵敏度，减少新冠患者临床假阴性检测结果，本研究建立了一种SARS-CoV-2低拷贝假病毒RNA捕获方法。方法：利用链霉亲和素磁珠，设计并合成生物素探针捕获SARS-CoV-2假病毒RNA；对磁珠用量、生物素探针浓度和洗脱次数等捕获条件进行了优化；参考WHO发布的序列，针对SARS-CoV-2病毒基因组的ORF1ab基因和N基因序列合成引物和TaqMan探针，对捕获的
【基金项目】
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中央高校基本科研业务费专项基金项目（2232020G-04）； 中央高校基本科研业务费学科交叉重点计划项目（2232020A-07）；
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目的：为提高COVID-19检测灵敏度，减少新冠患者临床假阴性检测结果，本研究建立了一种SARS-CoV-2低拷贝假病毒RNA捕获方法。方法：利用链霉亲和素磁珠，设计并合成生物素探针捕获SARS-CoV-2假病毒RNA；对磁珠用量、生物素探针浓度和洗脱次数等捕获条件进行了优化；参考WHO发布的序列，针对SARS-CoV-2病毒基因组的ORF1ab基因和N基因序列合成引物和TaqMan探针，对捕获的SARS-CoV-2假病毒RNA进行反转录实时荧光定量PCR检测。采用一步法和分步法检测、单重和多重实时荧光定量PCR检测，并分别比较检测结果。结果：本研究设计的生物素探针能富集到距离探针结合位点至少1.8 K处的序列，在生物素探针浓度12.5μM，磁珠的工作浓度333.33μg/m L时，合并RNA的两次洗脱液，对低拷贝病毒RNA的捕获效率最高。研究得到对低拷贝病毒RNA分步法比一步法、多重比单重实时荧光定量PCR检测更灵敏，进行分步法、多重实时荧光定量PCR检测限低于10 copies/μL，组间和重复实验组之间CT值变异系数均小于1%。所有阴性对照样品在检测中均为阴性。结论：本研究优化的链霉亲和素磁珠-生物素探针捕获法是富集SARS-CoV-2低拷贝假病毒RNA的有效方法，其抽提RNA病毒的结果优于一些商业化试剂盒，分步法、多重实时荧光定量PCR对SARS-CoV-2低拷贝假病毒RNA实现了高效检测，这为临床检测低拷贝RNA病毒提供了一种参考方案。
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