【摘 要】
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目的:构建KCTD10基因表达载体并包装成病毒颗粒。方法:合成KCTD10基因全长片段,构建p EZLv105-KCTD10载体,转化至大肠杆菌Stbl3中进行筛选。利用PCR及测序鉴定KCTD1-Lv105阳
【机 构】
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湖南医药学院临床医学院; 湖南医药学院生物医学中心; 长沙市中心医院眼科; 怀化市脑与神经内分泌重点实验室; 侗医药研究湖南省重点实验室;
【基金项目】
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湖南省自然科学基金项目(No.2015JJ4036);湖南省教育厅重点项目(15A134);怀化市科技计划重点项目(No.2017X2102)
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目的:构建KCTD10基因表达载体并包装成病毒颗粒。方法:合成KCTD10基因全长片段,构建p EZLv105-KCTD10载体,转化至大肠杆菌Stbl3中进行筛选。利用PCR及测序鉴定KCTD1-Lv105阳性克隆。将KCTD10-Lv105重组质粒和阳性对照e GFP-Lv105质粒同时与HIV包装质粒混合物共转染于293T细胞进行慢病毒包装,收集浓缩病毒颗粒。将所得病毒颗粒悬浮梯度稀释后感染293T细胞,利用Puromycin进行药筛滴度测定。结果:测序比对检测KCTD10-Lv105重组载体成功构建,荧光显微镜下观察e GFP-Lv105病毒包装成功,药筛检测KCTD10-Lv105浓缩病毒滴度为1.2×108TU/m L。结论:成功包装好过表达KCTD10的慢病毒颗粒,并为进一步研究KCTD10基因在胶质瘤的发生发展中的作用奠定了基础。
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