【摘 要】
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目的研究结核分支杆菌抗原85B(简称Ag85B)DNA疫苗经人气道上皮转化后的培养上清液对尘螨过敏哮喘患者外周血单个核细胞(PBMC)Th1/Th2细胞因子释放的调控作用.方法亚克隆构建表达Ag85B基因的真核表达载体pMG-Ag85B,经脂质体介导转化离体培养气道上皮细胞16HBE,并收集转化细胞培养上清液,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测转基因气道上皮Ag85B mRNA水平的表
【机 构】
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100034，北京大学第一医院呼吸科,广东省人民医院东病区呼吸科,510080,广州医学院,广州呼吸病研究所
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目的研究结核分支杆菌抗原85B(简称Ag85B)DNA疫苗经人气道上皮转化后的培养上清液对尘螨过敏哮喘患者外周血单个核细胞(PBMC)Th1/Th2细胞因子释放的调控作用.
方法亚克隆构建表达Ag85B基因的真核表达载体pMG-Ag85B,经脂质体介导转化离体培养气道上皮细胞16HBE,并收集转化细胞培养上清液,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测转基因气道上皮Ag85B mRNA水平的表达,螨过敏哮喘组(18例)和正常组(13例)PBMC在离体单独与螨或与Ag85B转染上清液共同培养,酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定其培养上清液中白介素5(IL-5)、γ干扰素(IFN-γ)的水平
结果RT-PCR法扩增转染的16HBE细胞中有992 bp长度的预期片断.无刺激状态下,哮喘患者和正常人PBMC培养上清液的IL-5、IFN-γ无差异,螨刺激可促进哮喘患者PBMC分泌IL-5,刺激和未刺激处理分别为(17.1±1. 9) pg/ml 和(11.9±0.9) pg/ml(P＝0.02);螨+Ag85B转染上清液与单纯螨刺激比较,前者IFN-γ水平显著高于后者,分别为(111.5±15.9) pg/ml和(58.8±7.8) pg/ml(P＝0.04), IFN-γ/IL-5的比值分别为7.2±4.8和4.9±2.5(P＝0.08).正常人不同刺激方法间比较,所有指标差异均无显著性(P＞0.05).
结论螨过敏的变应性哮喘患者的PBMC在螨刺激下向Th2免疫反应偏移,在螨变应原存在时转化Ag85B基因的人气道上皮细胞培养上清液,能够诱导PBMC释放 IFN-γ,调节免疫反应向Th1方向偏移.
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