目的 研究Dlx5 mRNA在培养的室管膜前下区(anterior subventriculor zone, SVZa)神经干细胞(NSCs)中的表达规律及其对SVZa NSCs方向分化的影响. 方法提取每一代培养的SVZa NSCs的总RNA,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Dlx5及Er81 mRNA表达的情况;将重组质粒pEGFP-mDlx5用电穿孔的方法转染不表达Dlx5 mRNA代次的NSCs,再检测Dlx5 mRNA的表达情况,并将转染细胞分化后进行免疫荧光染色,分析基因转染细胞与神经元分化的关系;另外,还用100 ng/ml的骨形态发生蛋白-2(BMP-2)处理不表达Dlx5 mRNA的NSCs,24 h后检测Dlx5 mRNA的表达情况.最后将不同Dlx5 mRNA表达情况的NSCs分化后用流式细胞仪检测神经元分化的比例. 结果细胞传代至第4代时Dlx5 mRNA表达消失,相应地,其神经元分化比例为(8.34±0.36)%,比表达Dlx5 mRNA的第3代NSCs的(19.16±0.75)%明显下降;用Dlx5基因转染该代 NSCs后,外源转染基因能够使内源性Dlx5 mRNA恢复表达,神经元分化比例也明显升高,为(35.66±0.58)%,免疫荧光染色也证实基因转染细胞分化成了神经元;而BMP-2处理也能诱导Dlx5 mRNA重新表达,神经元分化比例也有一定程度上升,与第3代NSCs的相似,为(22.27±0.12)%.除第3代NSCs分化组与BMP-2诱导组神经元分化比例差异无统计学意义外,其余各组间两两比较差异均有统计学意义(P《0.05). 结论随着传代次数的增加,到第4代时,SVZa NSCs Dlx5 mRNA表达消失,而外源性Dlx5基因转染及BMP-2可以诱导其重新表达;Dlx5基因能使新生大鼠来源的SVZa NSCs向神经元方向分化。
Dlx5 mRNA在室管膜前下区神经干细胞中的表达规律及其对神经元分化的影响
【摘 要】
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目的 研究Dlx5 mRNA在培养的室管膜前下区(anterior subventriculor zone, SVZa)神经干细胞(NSCs)中的表达规律及其对SVZa NSCs方向分化的影响. 方法提取每一代培养的SVZa NSCs的总RNA,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Dlx5及Er81 mRNA表达的情况;将重组质粒pEGFP-mDlx5用电穿孔的方法转染不表达Dlx5 mR
【机 构】
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400037,重庆,第三军医大学附属新桥医院神经外科,400037,重庆,第三军医大学附属新桥医院神经外科,400037,重庆,第三军医大学附属新桥医院神经外科,400037,重庆,第三军医大学附属新
【出 处】
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中华创伤杂志
【发表日期】
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2006年22期
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