【摘 要】
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旨在研究褪黑素（Melatonin，MT）对绵羊卵巢颗粒细胞增殖、凋亡、类固醇激素分泌及相关基因表达的影响，以期解析MT影响绵羊繁殖的路径。本研究采集一岁龄体重相近饲养条件相同的20只健康小尾寒羊母羊新鲜卵巢，收集2～3 mm卵泡的颗粒细胞，随机分为5组，每组5个重复，分别添加0、10-9、10-8、10-7、10-6 mol·L-1MT，培养48 h后CCK8和Annexin V-FITC分别检
【基金项目】
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河北省重点研发计划资助项目（19227041D）； 国家肉羊产业技术体系资助项目（CARS-38）；
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旨在研究褪黑素（Melatonin，MT）对绵羊卵巢颗粒细胞增殖、凋亡、类固醇激素分泌及相关基因表达的影响，以期解析MT影响绵羊繁殖的路径。本研究采集一岁龄体重相近饲养条件相同的20只健康小尾寒羊母羊新鲜卵巢，收集2～3 mm卵泡的颗粒细胞，随机分为5组，每组5个重复，分别添加0、10-9、10-8、10-7、10-6 mol·L-1MT，培养48 h后CCK8和Annexin V-FITC分别检测颗粒细胞的增殖和凋亡，确定体外培养浓度为10-7 mol·L-1，将细胞随机分为2组，每组3个重复，收集试验组(添加10-7 mol·L-1)和对照组（不添加）培养液及裂解液上清，ELISA检测孕酮(P4)、雌二醇(E2)和cAMP的含量，并利用RT-qPCR和Western blot分析MT对绵羊颗粒细胞MT受体基因、凋亡相关基因和类固醇分泌相关基因的mRNA和蛋白表达的影响。结果表明，添加MT各试验组均显著提高了颗粒细胞增殖活力，其中10-7 mol·L-1、10-6 mol·L-1和10-8 mol·L-1组颗粒细胞增殖活力显著高于10-9 mol·L-1组（P＜0.05），10-7 mol·L-1细胞增殖活力最高，但与10-6 mol·L-1和10-8 mol·L-1组间差异不显著（P＞0.05）。添加10-7 mol·L-1、10-6 mol·L-1和10-8 mol·L-1 MT颗粒细胞早期凋亡和晚期凋亡率极显著低于10-9 mol·L-1组和对照组（P＜0.01），其中10-7 mol·L-1组细胞凋亡率最低，但与10-6 mol·L-1和10-8 mol·L-1间差异不显著（P＞0.05），而10-9 mol·L-1组对细胞凋亡没有显著影响（P＞0.05）。添加10-7 mol·L-1 MT颗粒细胞P4分泌显著降低（P＜0.05），而对E2和cAMP水平无显著影响（P＞0.05）。添加10-7 mol·L-1 MT可显著上调MT受体基因MT1的mRNA和蛋白表达水平及抗凋亡基因Bcl-2的mRNA表达（P＜0.05），显著下调了FSHR、StAR、CYP11A1和3β-HSD的mRNA和蛋白表达（P＜0.05），以及凋亡基因BAX、Caspase-3的表达及BAX/Bcl-2比值（P＜0.05），对受体基因MT2、LHR和CYP19A1的表达无显著影响（P＞0.05）。综上，绵羊卵巢颗粒细胞体外培养添加MT通过上调抗凋亡基因表达，下调凋亡基因表达，抑制绵羊卵巢颗粒细胞凋亡；MT与MT1受体结合通过下调FSHR、StAR、CYP11A1和3β-HSD表达，抑制了P4的分泌。
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