【摘 要】
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目的 构建大鼠白细胞介素-1（IL-1）I型受体基因RNA干扰（RNAi）慢病毒表达载体，并观察其对体外大鼠软骨细胞的作用。方法筛选确定IL-1I型受体（IL—1RI）基因的RNAi有效靶序列，使用293T细胞包装产生慢病毒。收集293T细胞上清液并浓缩，得到滴度为1×10^7TU／ml的病毒。使用携带有效干扰片段的慢病毒分别以转染倍数（MOI）值20和50感染体外培养的软骨细胞，Westernb
【机 构】
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复旦大学附属华东医院骨科,上海200040,复旦大学附属华山医院骨科,复旦大学附属华东医院骨科,上海200040,复旦大学附属华东医院骨科,上海200040,复旦大学附属华东医院骨科,上海200040
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目的 构建大鼠白细胞介素-1（IL-1）I型受体基因RNA干扰（RNAi）慢病毒表达载体，并观察其对体外大鼠软骨细胞的作用。方法筛选确定IL-1I型受体（IL—1RI）基因的RNAi有效靶序列，使用293T细胞包装产生慢病毒。收集293T细胞上清液并浓缩，得到滴度为1×10^7TU／ml的病毒。使用携带有效干扰片段的慢病毒分别以转染倍数（MOI）值20和50感染体外培养的软骨细胞，Westernblot法测定软骨细胞中IL—1RI以及基质金属蛋白酶-1（MMP-1）的表达。结果适合感染软骨细胞的MOI为50，感染率〉70％。经过RNAi后，体外培养的软骨细胞IL-1RI以及MMP-1蛋白表达显著降低。结论慢病毒介导的大鼠IL-1RI基因干扰能够显著降低体外培养的软骨细胞中IL-1RI的表达，并进一步降低下游蛋白MMP-1的表达。
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