【摘 要】
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目的 为开发新型抗痤疮药物，构建具有杀菌和促进愈合的人防御素2和酸性成纤维因子1融合蛋白。方法 以人肝癌细胞HepG2 cDNA为模板，分别扩增hBD-2基因和haFGF-1基因。采用SOE-PC
【机 构】
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广东药科大学生命科学与生物制药学院/广东省生物活性药物研究重点实验室,广州新海医院检验科
【基金项目】
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广东省医学科学技术研究基金项目(A2017125)
论文部分内容阅读
目的 为开发新型抗痤疮药物，构建具有杀菌和促进愈合的人防御素2和酸性成纤维因子1融合蛋白。方法 以人肝癌细胞HepG2 cDNA为模板，分别扩增hBD-2基因和haFGF-1基因。采用SOE-PCR方法构建hBD2-haFGF1融合基因。构建hBD2-haFGF1/pET21b原核表达载体，并转化入E. coli BL(21)进行诱导表达。通过生物信息学方法对融合蛋白的理化性质进行预测和分析。结果 RT-PCR分别获得123 bp的hBD-2基因和420 bp的haFGF-1基因，SOE-PCR获得了588 bp的hBD2-haFGF1融合基因，成功构建原核表达载体hBD2-haFGF1/pET21b，经过IPTG诱导，hBD2-haFGF1融合蛋白可在E. coli BL(21)中有效表达，相对分子量为23 800。生物信息学显示hBD2-haFGF1蛋白适合在大肠杆菌中表达，是一个不稳定的亲水性蛋白，具有较好的热稳定性。hBD2-haFGF1融合蛋白主要由延伸链、β转角和随机卷曲组成，结构中保留了β防御素保守结构域和FGF超家族保守结构域。结论 构建了hBD2-haFGF1融合基因，并在体外诱导表达了hBD2-haFGF1融合蛋白，通过生物信息学分析对融合蛋白的理化性质进行了预测和分析，上述研究为进一步的纯化和活性分析奠定了研究基础。
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