【摘 要】
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背景:人单核细胞系THP-1细胞是典型的悬浮细胞系,其转染并瞬时表达外源蛋白比一般贴壁细胞相对困难。其中DEAE-葡聚糖介导的细胞转染方法虽然建立较早,但在国内应用很少。目
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属协和医院老年病科
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背景:人单核细胞系THP-1细胞是典型的悬浮细胞系,其转染并瞬时表达外源蛋白比一般贴壁细胞相对困难。其中DEAE-葡聚糖介导的细胞转染方法虽然建立较早,但在国内应用很少。目的:采用不同质粒转染方法介导质粒绿色荧光蛋白真核表达质粒(pEGFP-N1)转染人THP-1单核细胞,以获得较高转染效率的方法。方法:分别采用DEAE-葡聚糖、Lipofectamine 2000、FuGENE 6、梭华-Sofast转染试剂不同方法介导质粒绿色荧光蛋白真核表达质粒进行转染,测定不同方法的转染效率、及其对细胞活力的影响。结果与结论:荧光显微镜下观察及流式细胞仪检测结果均显示DEAE-Dextran介导的转染效率最高,Lipfectamine 2000脂质体次之,FuGENE 6和梭华-Sofast则明显低于前二者。将质粒绿色荧光蛋白真核表达质粒体外成功转染人THP-1单核细胞中,通过优化转染方法提高转染效率、降低对细胞活力的影响。
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