【摘 要】
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目的 观察白花丹素对乳腺癌细胞凋亡及自噬的影响,探讨其可能的作用机制.方法 采用不同浓度白花丹素作用于乳腺癌MCF-7和BT549细胞,CCK-8法检测细胞存活率,DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平,JC-1荧光探针检测线粒体膜电位(MMP),流式细胞术检测细胞凋亡情况,免疫荧光检测细胞内LC3B蛋白表达,Western blot检测细胞内Bax、Bcl-2、LC3B、AMPK和p-AMPK蛋白表达.结果 不同浓度白花丹素可抑制乳腺癌MCF-7和BT549细胞生长,抑制细胞克隆形成,其I
【机 构】
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海军军医大学长海医院药学部,上海200433;上海中医药大学交叉科学研究院,上海201203
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目的 观察白花丹素对乳腺癌细胞凋亡及自噬的影响,探讨其可能的作用机制.方法 采用不同浓度白花丹素作用于乳腺癌MCF-7和BT549细胞,CCK-8法检测细胞存活率,DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平,JC-1荧光探针检测线粒体膜电位(MMP),流式细胞术检测细胞凋亡情况,免疫荧光检测细胞内LC3B蛋白表达,Western blot检测细胞内Bax、Bcl-2、LC3B、AMPK和p-AMPK蛋白表达.结果 不同浓度白花丹素可抑制乳腺癌MCF-7和BT549细胞生长,抑制细胞克隆形成,其IC50分别为15.9 μmol/L和13.51 μmol/L;16、32 μmol/L白花丹素处理后,MCF-7细胞MMP降低,ROS水平升高,Bcl-2蛋白表达降低,Bax、LC3BⅡ、p-AMPK蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).使用AMPK抑制剂(10 μmol/L Dorsomorphin)或自噬抑制剂(5 mmol/L 3-MA)与白花丹素(32 μmol/L)同时处理 MCF-7细胞后,LC3BⅡ、p-AMPK蛋白表达较单独使用白花丹素(32μmol/L)时降低(P＜0.01,P＜0.05);使用溶酶体抑制剂(10μmol/L氯喹)与白花丹素(32μmol/L)同时处理MCF-7细胞后,LC3BⅡ、p-AMPK蛋白表达较单独使用白花丹素(32μmol/L)时升高(P＜0.01).结论 白花丹素可能通过激活AMPK通路促进乳腺癌细胞自噬,从而诱导细胞凋亡.
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