【摘 要】
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目的 建立非变性毛细管电泳分离乙肝病毒特异性巢式PCR产物方法,用于乙肝病毒B基因型和C基因型判断.方法 建立线性聚丙烯-聚乙二胺-TBE非变性毛细管电泳方法,分离母婴阻断失
【机 构】
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北京市疾病预防控制中心传染病地方病控制所
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目的 建立非变性毛细管电泳分离乙肝病毒特异性巢式PCR产物方法,用于乙肝病毒B基因型和C基因型判断.方法 建立线性聚丙烯-聚乙二胺-TBE非变性毛细管电泳方法,分离母婴阻断失败患儿血清中乙肝病毒基因型特异性巢式PCR的扩增产物,采用表观分子量鉴定B、C基因型特异性和非特异性扩增产物.结果 毛细管电泳条件为30.2cm×50μm毛细管,分离缓冲液为2％(w/v)线性聚丙烯酰胺+0.4％(w/v)聚乙二醇+lxTBE缓冲液(pH8.3).在9kV电压下12分钟内可分离DNA分子量梯度标准品(50 bp至300 bp)及PCR扩增产物,表观分子量与电泳迁移时间的曲线适合度大于0.9999.B型扩增产物表观分子量范围为282bp至285bp,非特异性扩增产物为276bp至280bp.C型为ll9bp至120bp,当前扩增条件下不产生非特异性扩增产物.结论 非变性毛细管电泳能够方便和准确地判断非特异性的B型扩增产物.
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