目的 探讨高迁移率族蛋白B1 (HMGB1)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖和迁移能力的影响.方法 通过稳定转染的方法将pRNA-u6.1/Neo-对照和pRNA-u6.1/Neo-HMGB1短发夹RNA(shRNA)质粒转至HUVEC细胞,构建对照及HMGB1 shRNA细胞株,通过蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)和实时荧光逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)进行稳定转染细胞的鉴定,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)检测细胞株增殖情况,流式细胞仪检测细胞株周期的分布,划痕实验检测细胞株迁移能力.结果 Western blotting及RT-PCR检测证明HMGB1 shRNA稳定转染的HUVEC细胞株构建成功,培养72 h时细胞中HMGB1蛋白及mRNA表达较对照细胞明显降低(蛋白:0.436±0.027比1.017±0.038,T=12.180,P=0.000; mRNA:0.436±0.031比1.020±0.051,T=9.660,P=0.001).MTT结果显示,HMGB1 shRNA稳定转染HUVEC细胞株2、3、4、5d的增殖能力比对照细胞株明显下降(2 d:0.210±0.023比0.240±0.011,T=1.050,P=0.351;3 d:0.240±0.022比0.361±0.030,T=3.203,P=0.033;4 d:0.373±0.031比0.531±0.033,T=3.530,P=0.022;5 d:0.441±0.031比0.602±0.030,T=4.180,P=0.106).流式细胞仪检测结果显示,HMGB1 shRNA细胞株在S期的比例明显低于对照细胞株[(13.10±1.10)％比(21.12±1.20)％,T=4.950,P=0.001].划痕实验结果显示,HMGB1 shRNA细胞株在细胞刮除后12h划痕愈合的细胞比例较对照细胞株明显降低[(21.07±3.33)％比(88.53±3.15)％,T=14.142,P=0.000].结论 HMGB1 shRNA能明显抑制HUVEC细胞的增殖和迁移能力。
高迁移率族蛋白B1对人脐静脉内皮细胞增殖及迁移能力的影响
【摘 要】
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目的 探讨高迁移率族蛋白B1 (HMGB1)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖和迁移能力的影响.方法 通过稳定转染的方法将pRNA-u6.1/Neo-对照和pRNA-u6.1/Neo-HMGB1短发夹RNA(shRNA)质粒转至HUVEC细胞,构建对照及HMGB1 shRNA细胞株,通过蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)和实时荧光逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)进行稳定转
【机 构】
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110001辽宁沈阳,中国医科大学附属第一医院重症医学科,110001辽宁沈阳,中国医科大学附属第一医院重症医学科,110001辽宁沈阳,中国医科大学附属第一医院重症医学科
【出 处】
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中华危重病急救医学
【发表日期】
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2013年25期
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先天性肝囊肿属肝脏的良性囊性病变,来源于胆管上皮细胞,可分为单纯性肝囊肿和多囊肝病.前者可为单发或多发性囊肿,而单纯多发性肝囊肿与多囊肝病虽无囊肿数目上的明确界定,但其发生学上有所不同.先天性肝囊肿的发病机制目前还不完全清楚,多认为单纯性肝囊肿与胚胎期肝内胆管发育异常有关.可能由于胚胎发育期肝内胆管局部退行性变过程中未正常吸收或因迷走胆管、淋巴管上皮增生阻塞导致管腔内分泌物潴留。