【摘 要】
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目的：克隆旱獭白细胞介素-10全长cDNA序列,进行序列分析,为IL-10分子的表达和在WHV感染中的应用奠定基础。方法：根据Genbank报道的土拨鼠IL-10 cDNA序列,在5非编码区和3非编码
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属同济医院实验动物室,武汉市430030华中科技大学同济医学院附属同济医院临床免疫研究室,武汉市430030华中科技大学同济医学院病原生物系,武汉市430030
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目的：克隆旱獭白细胞介素-10全长cDNA序列,进行序列分析,为IL-10分子的表达和在WHV感染中的应用奠定基础。方法：根据Genbank报道的土拨鼠IL-10 cDNA序列,在5非编码区和3非编码区设计特异性引物,提取旱獭脾组织总RNA作为模板,RT-PCR扩增旱獭IL-10 cDNA。PCR产物纯化后连接至T载体(pMD18-T),构建重组质粒pMD18-T-cm IL-10。对重组质粒进行酶切鉴定,选择阳性克隆测序。对所获得的序列应用分析软件进行分析。结果：RT-PCR扩增产物为685bp。重组质粒pMD18-T-cmIL-10经EcoR Ⅰ与Pst Ⅰ双酶切提示含目的基因片段。序列分析提示旱獭IL-10的编码序列为537bp,与土拨鼠IL-10的同源性高达100％。
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