【摘 要】
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目的 本研究通过检测三氧化二砷(ATO)处理前后维甲酸(RA)耐药的SK-N-AS细胞中HoxC9以及EZH2的表达,初步探寻ATO促进RA耐药的NB细胞分化的具体机制.方法 用CCK-8试剂盒测定ATO对NB细胞SK-N-AS增殖抑制率,倒置相差显微镜下观察细胞生长情况,并测量神经突触总长度值.利用质谱技术和非标定量蛋白组学方法检测ATO处理后SK-N-AS细胞蛋白信号丰度变化,并对与NB细胞分化相关蛋白进行差异化分析.Western Blot检测HoxC9、HoxD8及EZH2蛋白的表达情况.结果 (
【机 构】
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510030广州,中山大学孙逸仙纪念医院儿科肿瘤专科
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目的 本研究通过检测三氧化二砷(ATO)处理前后维甲酸(RA)耐药的SK-N-AS细胞中HoxC9以及EZH2的表达,初步探寻ATO促进RA耐药的NB细胞分化的具体机制.方法 用CCK-8试剂盒测定ATO对NB细胞SK-N-AS增殖抑制率,倒置相差显微镜下观察细胞生长情况,并测量神经突触总长度值.利用质谱技术和非标定量蛋白组学方法检测ATO处理后SK-N-AS细胞蛋白信号丰度变化,并对与NB细胞分化相关蛋白进行差异化分析.Western Blot检测HoxC9、HoxD8及EZH2蛋白的表达情况.结果 (1)ATO对SK-N-AS细胞的杀伤作用在4～128μM范围内呈浓度依赖性,ATO对SK-N-AS细胞的半抑制浓度IC50=95.36μM.(2)16μM的ATO处理SK-N-AS细胞24h后,神经突触总长度值升高,与对照组相比差异具有统计学意义(P＜0.05).(3) 16μM ATO处理24h后,SK-N-AS细胞内共鉴定到6424个表达蛋白,其中与分化相关的蛋白,上调的包括正常神经元分化标记物MAPT、NEFM等;下调的包括神经母细胞成瘤性标记物PHOX2B.(4) Western Blot结果表明,16μM ATO处理SK-N-AS细胞24h后,HoxC9、HoxD8蛋白的表达水平上调,EZH2蛋白表达水平下调.结论 (1)ATO可诱导SK-N-AS细胞的神经突触增多,上调SK-N-AS细胞中神经元正常分化相关的标记物HoxC9及HoxD8的表达,下调神经母细胞成瘤性标记物PHOX2B及EZH2.(2)ATO可能通过下调EZH2重新激活HoxC9的表达.
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