【摘 要】
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目的在大肠杆菌中高效表达镰形扇头蜱半胱氨酸蛋白酶(cysteinase)CysA和CysB,并对表达产物进行免疫保护效果测定.方法将cysA和cysB基因亚克隆到pET-32a载体,转化感受态大肠杆
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目的在大肠杆菌中高效表达镰形扇头蜱半胱氨酸蛋白酶(cysteinase)CysA和CysB,并对表达产物进行免疫保护效果测定.方法将cysA和cysB基因亚克隆到pET-32a载体,转化感受态大肠杆菌BL21,在IPTG诱导下进行表达;表达产物免疫家兔,首次免疫抗原剂量免为300μg/兔,二次免疫和三次免疫均为150μg/兔.三次免疫后进行攻击蜱试验,观察免疫保护效果.结果在IPTG诱导下,重组质粒pET32a-cysA和pET32a-cysB在大肠杆菌中获得高效表达,产生Trx-cysA和Trx-cysB融合蛋白,这两种融合蛋白经纯化后免疫家兔,分别使成蜱的吸附率降至17%和17%,饱血率降至42%和22%.结论重组质粒pET32a-cysA和pET32a-cysB在大肠杆菌中高效表达,表达产物能诱导家兔产生一定程度的抗蜱保护性免疫力.
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