甲状腺激素对大鼠脊髓损伤神经元的保护作用

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目的

探讨甲状腺激素对脊髓损伤神经元的保护作用及其分子机制。

方法

用含体积分数10%胎牛血清的杜尔伯科改良伊格尔(DMEM)培养基培养RN-dsc大鼠背脊神经元细胞,经胰蛋白酶消化转代后接种在培养板中并用不同条件进行处理:(1)对照组:用不含药物和血清的DMEM处理;(2)H2O2组:用含有100 μmol/L H2O2的无血清DMEM处理;(3)H2O2+10-6mol/L三碘甲状腺原氨酸(T3)组:用含有100 μmol/L H2O2和10-6mol/L T3的无血清DMEM处理;(4)H2O2+10-5mol/L T3组:用含有100 μmol/L H2O2和10-5mol/L T3的无血清DMEM处理;(5)阴性对照组:用Lipofectamine™2000试剂转染阴性对照模拟物;(6)miR-210组:用Lipofectamine™2000试剂转染miR-210模拟物。检测增殖细胞各组活力、凋亡数目、核因子E2相关因子2(Nrf-2)抗氧化通路分子等的表达量、miR-210的表达量;转染miR-210模拟物及阴性对照模拟物后检测Nrf-2抗氧化通路分子的表达量。

结果

H2O2组细胞的增殖活力及Nrf-2、抗氧化反应元件(ARE)、超氧化物歧化酶2(SOD2)、血红素氧合酶(HO-1)的蛋白表达量(0.39±0.06, 0.52±0.08, 0.31±0.08,0.25±0.05)显著低于对照组(1.00±0.15, 1.00±0.17, 1.00±0.13, 1.00±0.11)(P<0.05),凋亡数目及miR-210的表达量多于对照组(P<0.05)。H2O2+10-6mol/L T3组、H2O2+10-5mol/L T3组细胞的增殖活力及Nrf-2、ARE、SOD2、HO-1的蛋白表达量显著高于H2O2组(P<0.05),凋亡数目及miR-210的表达量低于H2O2组(P<0.05)。H2O2+10-5mol/L T3组细胞的增殖活力及Nrf-2、ARE、SOD2、HO-1的蛋白表达量(0.88±0.14, 0.84±0.12, 0.72±0.09, 0.69±0.09)显著高于H2O2+10-6mol/L T3组(0.73±0.09, 0.71±0.08, 0.58±0.09, 0.52±0.08)(P<0.05),凋亡数目及miR-210的表达量低于H2O2+10-6mol/LT3组(P<0.05)。miR-210组细胞中Nrf-2、ARE、SOD2、HO-1的蛋白表达量(0.37±0.06,0.24±0.05,0.45±0.08, 0.49±0.07)显著低于阴性对照组(1.00±0.13, 1.00±0.19, 1.00±0.15, 1.00±0.14)(P<0.05)。

结论

甲状腺激素能够通过抑制miR-210的表达来增强神经元氧化应激损伤过程中Nrf-2抗氧化通路的功能,进而减轻脊髓神经元的氧化应激损伤。

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