【摘 要】
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目的:获得纯化的人细胞核自身抗原精子蛋白(hNASP)及其多克隆抗体,为其功能研究做准备.方法:提取人睾丸组织总RNA,用自行设计的引物,PCR扩增hNASP的一段序列,PCR产物经TA克隆
【机 构】
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上海交通大学医学院组织学与胚胎学教研室
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目的:获得纯化的人细胞核自身抗原精子蛋白(hNASP)及其多克隆抗体,为其功能研究做准备.方法:提取人睾丸组织总RNA,用自行设计的引物,PCR扩增hNASP的一段序列,PCR产物经TA克隆后,通过BamH Ⅰ和HindⅢ双酶切克隆到pET-28a(+)中.在E.coli BL21中,用异丙基-β-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达His融合蛋白.样品超声处理后,经镍离子亲和树脂进行亲和层析纯化.用纯化的重组蛋白免疫家兔获取多克隆抗体.结果:对表达重组蛋白的质粒进行DNA测序以及表达的重组蛋白经过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,证实获取了目的蛋白.ELISA证实免疫家兔后获得高效价的抗体.结论:用上述原核生物表达的方法可以得到纯化的hNASP蛋白,用纯化的蛋白免疫家兔也能获得高效价的抗体.
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