目的　获得重组MPT64蛋白 ,研究其免疫学特性 ,评价其在结核病血清学诊断中的价值。方法　应用基因工程技术表达、纯化MPT64蛋白 ,通过Westernblotting分析其抗原性。分别以结核分枝杆菌PPD或纯化的rMPT64蛋白为抗原 ,通过ELISA方法及结核病一步法检测血清中抗结核抗体。结果　重组质粒pET1 5b MPT64测序表达除 83位密码子由CCA突变为CCG外 ,其余密码子均与报道的相同 ,但其氨基酸序列无变化。它在大肠杆菌BL2 1 (DE3)细胞内以包涵体形式存在 ,表达量占菌体总蛋白的 2 0～ 30 % ,分子量约 2 6kDa ,Westernblotting分析它与抗结核分枝杆菌多克隆抗体具有良好的免疫反应性。纯化后的rMPT64样品经SDS PAGE和光密度扫描分析表明其纯度约为 80 %左右 ,每1 0 0ml培养菌可获得 1 0mg左右的重组蛋白。以 33例正常人血清的OD值 + 2S为正常界限值 ,PDD的特异性和敏感性分别为 94% ( 31 /33)、63.7% ( 2 1 /33)、66.7% ;rMPT64纯化蛋白分别为 94% ( 31 /33)、30 .3( 1 0 /33) ;一步法分别为 88% ( 2 9/33)、66.7% ( 2 2 /2 3)。结论　pET1 5b MPT64大肠杆菌工程菌能以包涵体形式高效表达重组MPT64蛋白 ,该蛋白具有较高的抗原特异性和免疫反应性。rMPT64纯化蛋白有可能成为结核病血清学诊断的组合抗原之一。