【摘 要】
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目的 观察顺铂作用后,耐顺铂睾丸癌I-10/DDP细胞自噬水平的变化;探讨沉默ATG5、ATG7对顺铂作用后的自噬及细胞增殖的影响.方法 顺铂(15 μmol/L,12 h)作用I-10/DDP细胞后,免
【机 构】
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蚌埠医学院药学院,安徽 蚌埠 233030
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目的 观察顺铂作用后,耐顺铂睾丸癌I-10/DDP细胞自噬水平的变化;探讨沉默ATG5、ATG7对顺铂作用后的自噬及细胞增殖的影响.方法 顺铂(15 μmol/L,12 h)作用I-10/DDP细胞后,免疫印迹法检测LC3、p62的表达水平;透射电子显微镜和mCherry-GFP-LC3B双标法检测自噬水平.实验分为转染试剂对照组(Mork组)、阴性对照质粒组(NC组)、转染shRNA-ATG5质粒组(shRNA-ATG5组)、转染shRNA-ATG7质粒组(shRNA-ATG7组),免疫印迹法检测ATG5、ATG7的表达.顺铂(15 μmol/L, 12 h)作用转染组细胞后,免疫印迹法检测LC3、p62的表达;透射电子显微镜、mCherry-GFP-LC3B双标法检测自噬水平;MTT法检测细胞存活率;集落克隆实验检测细胞增殖情况.结果 顺铂处理后,I-10/DDP细胞中LC3Ⅱ的表达水平明显增加(P=0.001),p62的表达水平降低(P=0.01),自噬体数量增加.与NC组相比,shRNA-ATG5组、shRNA-ATG5组中ATG5、ATG7的表达量明显降低(P=0.005,P＜0.001).与单用顺铂组相比,shRNA-ATG5组与shRNA-ATG7组细胞用顺铂处理后LC3Ⅱ表达水平明显降低(P＜0.001),p62的表达水平明显增加(P＜0.001),自噬体数量减少、细胞存活率(P＜0.001)及克隆形成能力均降低.结论 沉默ATG5、ATG7后抑制顺铂介导的自噬,增强顺铂抑制细胞增殖的作用.
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