【摘 要】
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目的研制高效价、高特异性的抗细胞空泡毒素VacA的鸡蛋黄抗体(IgY),为研制幽门螺杆菌(H.pylori)治疗性抗体奠定基础。方法用纯化的重组细胞空泡毒素抗原免疫22周龄洛曼产蛋母
【机 构】
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重庆医科大学微生物学教研室,重庆医科大学微生物学教研室,西南农业大学荣昌校区蚕学与生物技术学院生物技术系,重庆医科大学微生物学教研室,重庆医科大学微生物学教研室,重庆医科大学微生物学教研室 重庆400
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目的研制高效价、高特异性的抗细胞空泡毒素VacA的鸡蛋黄抗体(IgY),为研制幽门螺杆菌(H.pylori)治疗性抗体奠定基础。方法用纯化的重组细胞空泡毒素抗原免疫22周龄洛曼产蛋母鸡,取免后所产鸡蛋,将蛋黄稀释、离心,收集上清,加硫酸铵沉淀。以ELISA间接法检测抗体效价,Bradford法检测蛋白含量,SDS-PAGE法检测相对分子质量及纯度。结果母鸡初次免疫后76d,抗体效价达到1∶6400,最高可达1∶12800。蛋黄抗体经纯化浓缩后,用SDS-PAGE分析,出现2条蛋白带,纯度可达80%以上,其含量为25·66mg/ml。结论已成功制备了抗重组细胞空泡毒素的特异性蛋黄抗体。
OBJECTIVE To develop a high titer and high specificity anti-cell vacuolar toxin (VacA) egg yolk antibody (IgY) for the development of H. pylori therapeutic antibody. Methods The 22-week-old Lohmann laying hens were immunized with the purified recombinant cell vacuolating toxin. The eggs were removed from the eggs and the yolks were diluted and centrifuged. The supernatant was collected and precipitated with ammonium sulfate. The antibody titer was detected by ELISA, the protein content was detected by Bradford method, and the relative molecular mass and purity were detected by SDS-PAGE. Results The hematin titer reached 1:6400 on the 76th day after primary immunization, reaching up to 1:12800. After the yolk antibody was purified and concentrated, it was analyzed by SDS-PAGE. Two protein bands appeared with the purity of over 80% and the content was 25.66 mg / ml. Conclusion The specific yolk antibodies against recombinant cellular vacuolar toxin have been successfully prepared.
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