H1亚型禽流感病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

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本研究旨在建立一种检测H1亚型禽流感病毒(AIV)的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。根据对GenBank中H1亚型AIV HA基因序列的分析,设计针对H1亚型AIV的HA基因特异性引物,并以H1亚型AIV的cDNA为模版,构建重组阳性质粒。采用梯度稀释重组标准品阳性质粒DNA的方法,建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(real-time PCR)标准曲线。敏感性试验结果显示,扩增效率和标准误差分别为100.9%和0.011 7,熔解曲线呈单一熔解峰。在35个Ct值内该方法可检测到1
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