【摘 要】
：
为研究猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)ORF7蛋白的亚细胞定位及其在TGEV复制中的作用.本研究通过RT-PCR扩增TGEV ORF7基因,将其与真核表达载体pEGFP-C1和pEGFP-N1相连接,构建表达载
【机 构】
：
河南科技大学 动物疫病与公共卫生重点实验室,河南 洛阳,471003西北农林科技大学 动物医学院,陕西 杨凌 712100;第四军医大学组织工程研发中心,陕西 西安 710000;西北农林科技大学 动
论文部分内容阅读
为研究猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)ORF7蛋白的亚细胞定位及其在TGEV复制中的作用.本研究通过RT-PCR扩增TGEV ORF7基因,将其与真核表达载体pEGFP-C1和pEGFP-N1相连接,构建表达载体pGFP-ORF7(GFP融合在TGEV ORF7的-NH2端)和pORF7-GFP(GFP融合在ORF7的-COOH端).分别将这两个质粒转染至ST细胞,western blot检测融合蛋白GFP-ORF7和ORF7-GFP的表达.通过生物信息学分析和激光共聚焦确定TGEV ORF7蛋白的亚细胞定位.在此基础上,通过细胞病变观察和荧光定量PCR检测TGEV ORF7蛋白对TGEV复制的影响.结果显示,本研究正确构建了真核表达载体pGFP-ORF7和pORF7-GFP,western blot检测结果表明融合蛋白GFP-ORF7和ORF7-GFP均正确表达,TGEV ORF7蛋白大小约为9 ku;结合生物信息学分析和激光共聚焦共定位结果显示TGEV ORF7特异性的定位于ST细胞的内质网中,其定位和其N端的信号肽序列有关;荧光定量PCR检测结果显示,过表达ORF7蛋白后TGEV mRNA转录水平降低99％,表明ORF7蛋白参与调控TGEV的复制.本研究为TGEV ORF7蛋白功能的研究提供了参考依据.
其他文献
四川盆地震旦系灯影组勘探成效显著、潜力巨大.对四川盆地川西南部开展野外露头、岩心岩石学特征和地球化学分析,并结合地震资料综合研究认为:川西南部汉王场构造汉深1井震旦
位于塔里木盆地北部坳陷的满深1井在奥陶系一间房组获得重大突破.通过对满深1井成藏条件、油藏特征及富集规律的深入研究,总结了塔里木盆地北部坳陷断控岩溶区高产井油气成藏
目的：研究超重或肥胖(OW/OB)、糖调节受损(IGR)和2型糖尿病(T2DM)患者血浆视黄醇结合蛋白4(RBP4)的变化及与APN(APN)、胰岛素抵抗(IR)、糖脂代谢和血压的关系。 方法：为2006
塔东古城地区寒武系—奥陶系碳酸盐岩是塔里木盆地非常重要的勘探领域,尤其是“两台夹一盆”的古地理格局,决定了研究区优越的源储配置和油气运移指向,但近几年的勘探没有达
文章介绍了一类准同生期云化叠合早期暴露岩溶成因的深层—超深层孔洞型碳酸盐岩储层.基于区内露头与钻井资料,开展了岩石学、储层地质学及地球化学研究,发现四川盆地中二叠
研究背景： 颈椎关节突关节又被称为颈椎小关节，属于滑膜关节，其在颈椎中发挥引导生理运动功能与维持稳定性的重要作用，颈椎小关节的退变和损伤是引起慢性颈痛的最常见的原因之
为了解H5N3亚型禽流感病毒(AIV)的生物学特性,本研究对从我国广西省鸭体内分离到的一株低致病力H5N3亚型AIV DK/GX/S11453/2019(H5N3)进行了全基因组序列分析、抗原性分析、