【摘 要】
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目的获取旋毛虫抗原的cDNA克隆并进行蛋白的原核表达. 方法应用兔抗旋毛虫成虫可溶性全虫抗原血清对旋毛虫成虫cDNA文库进行筛选,并用兔人工感染旋毛虫血清对强阳性克隆进行
【机 构】
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首都医科大学基础医学院寄生虫学教研室,UMR BIPAR INRA AFSSA ENVA UPVM,Department of Microbiology and Tropical medicine
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目的获取旋毛虫抗原的cDNA克隆并进行蛋白的原核表达. 方法应用兔抗旋毛虫成虫可溶性全虫抗原血清对旋毛虫成虫cDNA文库进行筛选,并用兔人工感染旋毛虫血清对强阳性克隆进行再筛选.将编号为Ts87阳性克隆的基因片段亚克隆入PET-28a(+)表达载体,IPTG诱导表达后用SDS-PAGE电泳分析表达产物. 结果免疫筛选获得阳性克隆Ts87;成功构建重组表达质粒PET-28a(+)/Ts87.诱导表达该融合蛋白,SDS-PAGE电泳表明,其能表达一分子质量约为40 ku的融合蛋白,与预测分子质量相符. 结论筛选到cDNA克隆Ts87,与兔抗旋毛虫成虫可溶性全虫抗原血清和兔人工感染旋毛虫血清均产生特异性免疫反应;PET原核表达系统所获重组蛋白为蛋白功能研究奠定了基础.
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