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目的:探讨外周血炎症因子及肺组织MHCⅡ基因在脂多糖(LPS)致急性呼吸窘迫综合征(ARDS)模型小鼠体内的表达量改变,通过研究炎症反应通路探讨慢病毒转染沉默肺组织MHCⅡ基因对内皮祖细胞移植(EPCs)治疗ARDS的作用,为治疗ARDS提供新思路。方法:选78只昆明白雄性小鼠,随机分为4组,(1)正常对照组(NC组)(2)脓毒症模型组(LPS组)(3)内皮祖细胞移植组(LPS+EPCs组)(4)MHCⅡ慢病毒干扰组(LPS+MHCⅡ-+EPCs组)。ARDS模型建立:以12mg/kg向(2)(3)(4)组小鼠尾静脉注射LPS,建立脓毒模型;1小时后向(3)组小鼠尾静脉注射200ul EPCs;向(4)组小鼠尾静脉注射MHCⅡ慢病毒100ul,观察1小时后,再向(4)组小鼠尾静脉注射200ul EPCs。模型建立第三天(d3),(3)与(4)组,用10%苯巴比妥浅麻醉后活体成像仪上荧光示踪;d3及d7各组小鼠麻醉解剖,留取肺组织行HE染色及快速冰冻切片,观察各组显微镜下病理改变及荧光定位情况;外周血酶联免疫吸附试验法(Elisa)方法检测炎性因子TLR-4、NF-KB、IL-12、TNF-a的表达量;荧光定量PCR(RT-PCR)检测TLR-4以及MHCⅡ mRNA表达情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)方法检测MHCⅡ蛋白的表达情况。多组间数据分析采用方差分析,Pearson法分析相关性。结果:1、组织病理结果:NC组肺组织结构正常,LPS组肺泡及间质结构紊乱无序,炎性浸润及纤维素样渗出,肺泡及毛细血管腔出血狭窄,呈现大面积水肿及炎症细胞浸润损伤;LPS+EPCs组较LPS组损伤减轻;LPS+MHCⅡ-+EPCs组炎性细胞浸润减少,肺泡及间质结构基本完整。2、EPCs及MHCⅡ慢病毒示踪结果:LPS+EPCs组与LPS+MHCⅡ-+EPCs组组肺组织快速冰冻切片均可见标记EPCs及MHCⅡ慢病毒的绿色荧光表达,活体显像也可见标记EPCs及MHCⅡ慢病毒的荧光主要在胸部表达。3、Elisa法检测炎性因子TLR-4、NF-KB、IL-12、TNF-a表达,在NC组、LPS组、LPS+EPCs组、LPS+MHCⅡ-+EPCs组表达量d3分别为(1.56±0.111、38.0±11.0、0.244±0.0794、24.9±4.05)pg/m L,(2.98±0.187、273±27.6、5.36±0.658、107±18.1)pg/m L,(2.54±0.182、125±27.3、2.23±0.763、71.4±8.13)pg/m L,(1.81±0.201、59.0±15.6、0.531±0.150、44.1±4.81)pg/m L。d7分别为(1.54±0.129、2.90±0.194、2.33±0.159、1.63±0.166)pg/m L,(36.7±11.7、233±28.9、111±42.0、44.1±13.9)pg/m L,(0.292±0.0510、2.94±0.696、1.57±0.439、0.356±0.0783)pg/m L,(24.0±4.33、85.0±15.6、63.6±11.6、32.7±5.23)pg/m L。LPS组较NC组均表现升高(均P<0.0001),而LPS+EPCs组及LPS+MHCⅡ-+EPCs组较LPS组均表现降低(均P<0.0001),且LPS+MHCⅡ-+EPCs组较LPS+EPCs组又表现明显降低(均P<0.0001),LPS+MHCⅡ-+EPCs组较NC组无明显差异(P>0.05)。d3与d7无明显差异(P>0.05)。4、RT-PCR检测TLR-4、MHCⅡ mRNA表达,在NC组、LPS组、LPS+EPCs组、LPS+MHCⅡ-+EPCs组d3分别(89.1±55.6、0.303±0.0821),(2222±924、5.62±0.819),(743±351、2.98±0.773),(174±91.2、0.526±0.0745)。d7分别为(93.9±62.3、0.286±0.0639),(1533±688、4.55±0.697),(592±144、2.88±0.682),(156±85.5、0.464±0.109)。LPS组较NC组表达量均表现升高(均P<0.0001),而LPS+EPCs组及LPS+MHCⅡ-+EPCs组较LPS组表达量均表现降低(均P<0.0001),且LPS+MHCⅡ-+EPCs组较LPS+EPCs组表达量又明显降低(均P<0.0001),LPS+MHCⅡ-+EPCs组较NC组无明显差异(P>0.05)。5、western blot检测MHCⅡ蛋白表达,NC组、LPS组、LPS+EPCs组、LPS+MHCⅡ-+EPCs组,d3分别为(0.356±0.0669),(1.49±0.310),(0.924±0.200),(0.544±0.0558)LPS组较NC组MHCⅡ蛋白灰度值均升高(均P<0.0001),而LPS+EPCs组及LPS+MHCⅡ-+EPCs组较LPS组MHCⅡ蛋白灰度值均表现降低(均P<0.0001),且LPS+MHCⅡ-+EPCs组较LPS+EPCs组MHCⅡ蛋白灰度值又表现明显降低(均P<0.0001),LPS+MHCⅡ-+EPCs组较NC组无明显差异(P>0.05)。6、d3实验模型中LPS组MHCⅡ与TLR4、NF-κB、TNF-a、IL-12均呈正相关(r2=0.824、0.867、0.763、0.830,且均p<0.05),同时TLR4在基因及蛋白水平呈强正相关(r2=0.991,且均p<0.001);LPS+EPCs组MHCⅡ基因相对表达量与IL-12、MHCⅡ蛋白、TLR4 mRNA及其蛋白、NF-κB均呈正相关(r2=0.824、0.880、0.978、0.978、0.938,且均p<0.05),同时TLR4在基因及蛋白水平呈强正相关(r2=0.998,且p<0.001);LPS+MHCⅡ-+EPCs组MHCⅡ基因相对表达量与IL-12、MHCⅡ蛋白、NF-κB、TNF-a、TLR4蛋白均呈正相关(r2=0.965、0.926、0.846、0.795、0.875,且均p<0.05),同时TLR4在基因及蛋白水平呈强正相关(r2=0.998,且p<0.001)。结论:1、脓毒所致ARDS时炎症因子TLR-4、NF-KB、IL-12、TNF-a明显增高;肺组织MHCⅡ基因及蛋白表达明显增高,TLR-4基因及蛋白表达明显增高;MHCⅡ与TLR-4、NF-KB、IL-12、TNF-a明显正相关。2、EPCs移植可以部分减少TLR-4、NF-KB、IL-12、TNF-a及MHCⅡ的表达;MHCⅡ与TLR-4、NF-KB、IL-12明显正相关。3、MHCⅡ基因干扰后进行EPCs移植,可以明显抑制TLR-4、NF-KB、IL-12、TNF-a及MHCⅡ的表达;且均较单独EPCs移植组明显下降;MHCⅡ与TLR-4、NF-KB、IL-12、TNF-a依然表现为正相关。