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建立了一种反相高效液相色谱梯度洗脱分离测定四环素类药物的新方法.采用DiamonsilTM C18 ODS (250 mm×4.6 mm i.d, 5 μm)色谱柱,以甲醇-乙腈-0.01 mol/L草酸为流动相,流速1.0 mL/min,270 nm检测,在10 min内分离检测四环素等7种化合物.同时还研究了流动相组成、梯度条件、pH值、草酸浓度等因素对分离效果的影响.