研究沉默线粒体分裂蛋白1(Fis1)对人脑神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y细胞)Fis1、线粒体融合蛋白1(Mfn1)及线粒体膜电位水平的影响,并进一步探讨线粒体融合分裂在慢性氟中毒发病机制中的作用。
方法体外培养SH-SY5Y细胞,待细胞贴壁生长进入对数增长期时进行实验,采用成组设计将细胞分为未染氟空白对照组、染氟组[2 mmol/L氟化钠(NaF)]、染氟阴性对照组[2 mmol/L NaF+非特异性小干扰RNA(siRNA)]、沉默组(2 mmol/L NaF+ siRNA-Fis1)。蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中Fis1和Mfn1蛋白表达水平;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测Fis1和Mfn1 mRNA表达水平;线粒体膜电位检测试剂盒检测细胞线粒体膜电位水平。
结果与空白对照组(1.37 ± 0.18、1.00 ± 0.04,1.57 ± 0.19、1.00 ± 0.04,1.00 ± 0.10)比较,染氟组Fis1蛋白(1.72 ± 0.04)及mRNA表达水平(1.48 ± 0.13)均升高,Mfn1蛋白(0.87 ± 0.02)及mRNA表达水平(0.69 ± 0.07)均降低,线粒体膜电位水平(0.76 ± 0.13)降低(P均< 0.05)。与空白对照组比较,沉默组Fis1蛋白(0.79 ± 0.07)及mRNA表达水平(0.06 ± 0.03)均降低,Mfn1蛋白(1.71 ± 0.04)及mRNA表达水平(1.52 ± 0.05)均升高(P均< 0.05),线粒体膜电位水平(0.94 ± 0.01)有降低趋势。与染氟组比较,沉默组Fis1蛋白及mRNA表达水平均降低,Mfn1蛋白及mRNA表达水平均升高,线粒体膜电位水平升高(P均< 0.05)。
结论人工抑制Fis1基因表达水平可降低氟致SH-SY5Y细胞的线粒体分裂和线粒体膜电位损伤。