沉默线粒体分裂蛋白1基因对氟致人脑神经母细胞瘤细胞株线粒体融合蛋白和膜电位损伤的影响

来源 :中华地方病学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:unian1981
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目的

研究沉默线粒体分裂蛋白1(Fis1)对人脑神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y细胞)Fis1、线粒体融合蛋白1(Mfn1)及线粒体膜电位水平的影响,并进一步探讨线粒体融合分裂在慢性氟中毒发病机制中的作用。

方法

体外培养SH-SY5Y细胞,待细胞贴壁生长进入对数增长期时进行实验,采用成组设计将细胞分为未染氟空白对照组、染氟组[2 mmol/L氟化钠(NaF)]、染氟阴性对照组[2 mmol/L NaF+非特异性小干扰RNA(siRNA)]、沉默组(2 mmol/L NaF+ siRNA-Fis1)。蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中Fis1和Mfn1蛋白表达水平;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测Fis1和Mfn1 mRNA表达水平;线粒体膜电位检测试剂盒检测细胞线粒体膜电位水平。

结果

与空白对照组(1.37 ± 0.18、1.00 ± 0.04,1.57 ± 0.19、1.00 ± 0.04,1.00 ± 0.10)比较,染氟组Fis1蛋白(1.72 ± 0.04)及mRNA表达水平(1.48 ± 0.13)均升高,Mfn1蛋白(0.87 ± 0.02)及mRNA表达水平(0.69 ± 0.07)均降低,线粒体膜电位水平(0.76 ± 0.13)降低(P均< 0.05)。与空白对照组比较,沉默组Fis1蛋白(0.79 ± 0.07)及mRNA表达水平(0.06 ± 0.03)均降低,Mfn1蛋白(1.71 ± 0.04)及mRNA表达水平(1.52 ± 0.05)均升高(P均< 0.05),线粒体膜电位水平(0.94 ± 0.01)有降低趋势。与染氟组比较,沉默组Fis1蛋白及mRNA表达水平均降低,Mfn1蛋白及mRNA表达水平均升高,线粒体膜电位水平升高(P均< 0.05)。

结论

人工抑制Fis1基因表达水平可降低氟致SH-SY5Y细胞的线粒体分裂和线粒体膜电位损伤。

其他文献
期刊
长期氟暴露能引发慢性氟中毒,对机体各组织产生不同程度的损伤。最新的研究表明,氟化物可诱导细胞自噬的发生,氟介导细胞自噬相关信号通路机制的研究已有初步进展。因此,作者就氟化物诱导细胞自噬机制以及自噬、凋亡之间关系的研究进展进行综述,为进一步的研究提供相关依据。
目的探讨中国北方汉族人群Bcl-2相关抗凋亡蛋白3(BAG3)基因的多态性与克山病患者之间的关系。方法血样来自于2002年在陕西省黄陵县以285例汉族人群研究对象,包括79例克山病患者(病例组)和206例健康对照人群(对照组),由西安交通大学地方病防治研究所提供,- 80 ℃保存。从外周血中提取基因组DNA,采用飞行时间质谱分型技术对候选位点进行基因分型。使用SPSS 16.0和TYPER 4.0