【摘 要】
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目的 探讨锌指蛋白403(zinc finger protein 403,ZFP403)在卵巢上皮细胞中的生物学功能及相关机制.方法 通过构建ZFP403-shRNA慢病毒,转染卵巢上皮细胞IOSE80,嘌呤霉素抗性筛选得到稳定沉默ZFP403的细胞株;通过qRT-PCR和Western blotting评价ZFP403沉默效果;采用平板集落形成试验评价沉默ZFP403后细胞生长能力的变化;采用软琼脂集落形成试验评价沉默ZFP403后细胞锚着非依赖性生长能力;通过流式细胞术评价沉默ZFP403后对细胞周期
【机 构】
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浙江中医药大学附属绍兴中医院西药剂科,浙江绍兴312000;浙江中医药大学药学院,杭州311402
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目的 探讨锌指蛋白403(zinc finger protein 403,ZFP403)在卵巢上皮细胞中的生物学功能及相关机制.方法 通过构建ZFP403-shRNA慢病毒,转染卵巢上皮细胞IOSE80,嘌呤霉素抗性筛选得到稳定沉默ZFP403的细胞株;通过qRT-PCR和Western blotting评价ZFP403沉默效果;采用平板集落形成试验评价沉默ZFP403后细胞生长能力的变化;采用软琼脂集落形成试验评价沉默ZFP403后细胞锚着非依赖性生长能力;通过流式细胞术评价沉默ZFP403后对细胞周期的影响;通过Western blotting试验研究沉默ZFP403后影响细胞周期的相关机制.结果 经嘌呤霉素筛选成功构建了ZFP403稳定沉默的细胞株(IOSE80-ZFP403-shRNA1,2)及阴性的对照细胞株(IOSE80-shRNA-NC);平板集落形成试验结果表明沉默ZFP403能明显促进上皮细胞的生长;软琼脂集落形成试验结果表明沉默ZFP403后,上皮细胞具有锚着非依赖性增长能力;流式细胞术结果表明沉默ZFP403能明显促进细胞周期进程;Western blotting结果表明ZFP430通过影响p-cdc2,cdc2,cyclinB1,p21蛋白的表达而影响细胞周期.结论 ZFP403通过影响卵巢上皮细胞的异常生长而发挥其生物学功能.ZFP403的表达水平可能影响了卵巢上皮细胞向卵巢癌的转变,具有作为早期卵巢癌临床诊断标志物的可能性.
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